核移植技術を用いたマウス胚性幹細胞由来個体の作出に関する研究

利用核移植技术创建小鼠胚胎干细胞衍生个体的研究

• 批准号: 06268210
• 负责人: 角田 幸雄
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06268210/
• 关键词: 胚性幹細胞; 核移植

ES細胞の持つ多能性を利用したキメラを介するトランスジェニックマウスの作出には長期間を要する。そこで、本研究ではキメラを介さずにES細胞由来の個体を直接作出するための核移植技術を開発することを目的に計画した。本年度は、核移植卵の発生能を向上させるために、(1)非蛍光下での第2減数分裂中期染色体の除去法ならびに(2)電気刺激による単為発生誘起法を確立した上で、(3)卵細胞質とドナー核の細胞周期の関係を検討した。その結果、これまではヘキスト染色後蛍光顕微鏡下で染色体の除去を行っていたが、染色せずに明視野下で染色体除去が可能であることが判明した。直流電流の電圧、通電時間、通電回数などを検討した結果、最も良い区における単為発生誘起率ならびに胚盤胞への発生率は、それぞれ100%ならびに94%ときわめて高いことが判明した。ついで、これらの条件下で卵細胞質とドナー核の細胞周期の関係を検討した。すなわち、2細胞期胚をノコダゾールで処置後DNA阻害剤であるアフィディコリン存在下で4細胞期へ分裂させ(G_1/S期)、排卵直後の未受精卵あるいは電気的に活性化刺激を与えた卵細胞質と融合させてその発生能を調べた。S期およびG_2期は、4細胞期へ分裂後種々の時間を用いた。これまでのところ、G_1/S期の核を排卵直後の未受精卵に融合させた場合と分裂後2.5〜7.5時間目のS期の核を活性化後10〜11時間目の卵細胞質に融合させた場合に発生率が高いことが判明した。

ES cells maintain pluripotency and utilize it for a long period of time. This research is based on the individual origin of ES cells and the direct creation of nuclear transplantation technology and the purpose of this research. This year, the nuclear transfer egg can produce the best results, (1) The second meiotic metaphase chromosome removal method can be done under non-light. (2) The method of inducing pregnancy induced by electrostatic stimulation has not been established. (3) The relationship between egg cytoplasm and nucleus and cell cycle has not been established.その results, これまではヘキスト staining and removal of chromosomes under a microscopeていたが、Staining せずにChromosome removal under bright field view is possible and であることがIt is clear that した. The DC current voltage, energization time, number of energization times, the result, and the optimal area are the incidence rates of rashes. The blastoderm cells of the ならびにへの発gene rate is は, and the それぞれ100% ならびに94% ときわめて高いことがdetermination is した. The relationship between egg cytoplasm and nucleus and cell cycle under the conditions of ついで and これらの.すなわち, 2-cell stage embryo をノコダゾールで treatment after DNA blocking treatment であるアフィディコリン 4-cell stage へdivision させ(G _1/S phase), the activation of the unfertilized egg immediately after ovulation stimulates the fusion of the egg cytoplasm and the energy of the unfertilized egg. S phase, G_2 phase, 4-cell phase, post-division seeding, and time of seeding.これまでのところ、G_1/S phase のnuclear を straight after ovulation のunfertilized egg fusion させた occasion 2.5~7.5 hours after cleavage It is clear that the egg cytoplasm is fused 10 to 11 hours after the activation of the nucleus in the S phase, and the reproductive rate is high in this case.

项目成果

Kato,Y.,Tsunoda,Y.: "Gierm cell nucki of mab fetal mice can Support development of chimeras to midgestation following Serial nuclear transplantation" Development. 121(in press).

Kato,Y.,Tsunoda,Y.：“mab 胎儿小鼠的 Gierm 细胞核可以支持连续核移植后嵌合体发育至妊娠中期”开发。

Kato,Y.,Tsunoda,Y.: "Effect of rednction of cytoplasm of mouse 2-cell embryos on blastomere formation and develcpmental ability in vitro and in vivo" Theriogenology. 41. 1483-1488 (1994)

Kato，Y.，Tsunoda，Y.：“小鼠 2 细胞胚胎细胞质还原对卵裂球形成和体外和体内发育能力的影响”动物发生学。

Tsunoda,Y.,Kato,Y.: "Development of enucleated mouse eocytes receiving fetal germ cells treated with PDGF and FGF after activaction with electrical stimulation" J.Reprod.Dev.(in press).

Tsunoda,Y.,Kato,Y.：“接受电刺激激活后用 PDGF 和 FGF 处理的胎儿生殖细胞的去核小鼠卵母细胞的发育”J.Reprod.Dev.（出版中）。

Takano.H.,Shimizu,S,Koyama,C,Kato,Y.,Tsunoda,Y.: "Production of offspring by nuclear fransfeeerd bovine embnyes Produced in vitro" J.Reprod.Dev.40. 167-170 (1994)

Takano.H.，Shimizu，S，Koyama，C，Kato，Y.，Tsunoda，Y.：“体外产生的核转染牛胚胎产生后代”J.Reprod.Dev.40。

Kato,Y.,Tsunoda,Y.: "Studies on the pluripotency of mouse embryonc cells on germ line at 3.5to8.5 and 11.5 days post coitum after aggregation with embryos." Develop.Growth&Differ. (in press).

Kato,Y.,Tsunoda,Y.：“与胚胎聚集后交配后 3.5 至 8.5 和 11.5 天小鼠胚胎细胞在种系上的多能性研究。”