核移植技術を用いたマウス胚性幹細胞由来個体の作出に関する研究

利用核移植技术创建小鼠胚胎干细胞衍生个体的研究

• 批准号: 07260213
• 负责人: 角田 幸雄
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07260213/
• 关键词: 核移植; マウス; 胚性幹細胞

発生能の高い核移植技術を確立するために、細胞周期をG_1、S、G_2、期に同調した4細胞期胚の核をM期あるいはS期の除核未受精卵と融合し、その発生能を検討した。その結果、G_1期の核をM期の除核卵細胞質と融合し、直後に活性化刺激を与えた場合に核移植卵の桑実胚〜胚盤胞期への発生率が12%と他の区に比べて高いことが判明した。しかしながら、これらの発育胚43個を8匹の偽妊娠雌に移植したが、産子は全く得られなかった。そこで、核移植卵が前核期あるいは2細胞期へ発生した時点で受精卵由来の除核前核期卵あるいは2細胞期胚に再度核移植して発生させた後、受胚雌へ移植した。その結果、前核期で置換した場合の桑実胚〜胚盤胞期への発生率は、44〜50%、2細胞期で実施した場合の発生率は25〜62%といずれのばあいも著しく向上することが判明した。また、これらの発育胚76個をそれぞれ1〜数個ずつ計42匹の、ドナー胚を採取したマウスとは毛色の異なる妊娠雌に移植したところ合計11匹(14%)の産子が得られた。産子はいずれも正常な形態をしており、また生殖能力も正常であった。なお、再置換は、前核期よりも2細胞期で実施した方が産子への発生率が高いことも判明した。

When the high-level nuclear transfer technology for developmental capabilities was established, the cell cycle was synchronized in G_1, S, and G_2 stages, and the nucleus of a 4-cell embryo was fused with a denucleated unfertilized egg in M stage and S stage, and its developmental capabilities were investigated. The results showed that the survival rate of nuclear transfer eggs in morula embryo to blastoderm stage was 12% in G_1 stage and higher than that in other stage. 43 embryos were born and 8 embryos were transferred from pseudo-pregnant females. When the embryo is transferred from the embryo to the embryo, the embryo is transferred from the embryo to the embryo The results showed that the survival rate of morula to blastoderm cells was 44 ~ 50% in the case of pre-nuclear replacement, and 25 ~ 62% in the case of 2-cell replacement. 76 embryos were developed, including 1 to several embryos, totaling 42 embryos, and 11 embryos (14%) were produced. The birth of a child is normal in shape and reproductive ability. The rate of reproduction of children in the pre-nuclear stage and the post-nuclear stage is high.

项目成果

Y. Kato: "Pluripotency of mouse embryonic cells on germ line at 3.5-8.5 and 11.5 days post-coitum after aggregation with precompacted embryos" Develop. Growth Differ.37. 79-84 (1995)

Y. Kato：“与预压实胚胎聚集后，交配后 3.5-8.5 和 11.5 天小鼠胚胎细胞在种系上的多能性”发育。

Y. Tsunoda: "Development of enucleated mouse oocytes receiving PDGF or FGF treated male germ cells after activation with electrical stimulation" J. Reprod. Dev.41. 71-75 (1995)

Y. Tsunoda：“电刺激激活后，接受 PDGF 或 FGF 处理的雄性生殖细胞的去核小鼠卵母细胞的发育”J. Reprod。

Y. Kato: "Nuclear transfer of inner cell mass cells and fetal germ cells at different cell cycles into enuckated zygotes at the M phase in the mouse" J. Reprod. Dev.41. 345-351 (1995)

Y. Kato：“将不同细胞周期的内细胞团细胞和胎儿生殖细胞核转移到小鼠 M 期的去核受精卵中”J. Reprod。