核移植技術を用いたマウス胚性幹細胞由来個体の作出に関する研究

利用核移植技术创建小鼠胚胎干细胞衍生个体的研究

• 批准号: 08252210
• 负责人: 角田 幸雄
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08252210/
• 关键词: 核移植; 胚盤胞; 内細胞塊細胞

平成7年度の研究によって、4細胞期胚のG_1期の核を活性化直前の卵細胞質と融合した場合に体外での発生能が高いこと、核移植卵の核をさらに受精卵由来の卵細胞質へ再度置換することによって正常なマウスへ発生することが明らかとなった。また、同様な核移植法を用いることによって後期桑実胚細胞由来の産子を得ることができた。本年度は、この核移植実験系を用いて胚盤胞内細胞塊(ICM)細胞ならびにES細胞由来核移植卵の個体への発生能を追求した。ICM細胞の核移植では、自然交配後3.5日目に採取した胚盤胞をノコダゾール添加培地で12時間培養後アフィディコリン添加培地で分裂させ、透明帯を除去し、免疫手術法でG_1期のICM細胞を単離した。ついで、ICM細胞1個をあらかじめ第2減数分裂中期の染色体を除去したM期の除核卵細胞質へ、HVJ(センダイウイルス)を用いて融合させ、電気的活性化刺激を与えた。さらに、2細胞期で体外受精由来の2細胞期胚の両割球との交換を行った後発生させ、受胚雌へ移植した。その結果、2回目の核移植で15〜64%が桑実胚〜胚盤胞へ発生し、20個の核移植胚から正常な生殖能力のある2匹の産子が得られた。つぎに、G_1期に同調したES細胞(TT2)の核移植を行ったところ、核移植卵のうち37〜47%が桑実胚〜胚盤胞へ発生することが判明した。しかしながら、こらまでのところ産子を得るには至っていない。

In 2007, we conducted a study on nuclear activation of 4-cell embryos at G_1 stage, egg cytoplasm and fusion in vitro, egg development energy, nuclear transfer, egg cytoplasm replacement from fertilized egg origin, and normal egg development. The method of nuclear transplantation is used in the production of embryos from late mori. This year, the nuclear transfer system was used to develop the ability of embryo disc intracellular cell mass (ICM) cells and ES cells derived from nuclear transfer eggs. ICM cells were isolated at G_1 stage by immunosurgery after nuclear transplantation and natural mating at 3.5 days after embryo culture and 12 days after culture. In ICM cells, 1 chromosome in metaphase 2 is removed, and the cytoplasm of enucleated eggs in M stage is fused with HVJ. Activation of electrical stimulation is also carried out. In vitro fertilization of 2-cell embryos and exchange of 2-cell embryos As a result, 15 ~ 64% of the embryos from the two rounds of nuclear transfer were born, and 20 embryos from the two rounds of nuclear transfer were born with normal reproductive ability. 37 ~ 47% of nuclear transfer eggs were obtained from ES cells (TT2) in G_1 and G_1 stages. The child is born in the middle of the night.

项目成果

Y.Kato: "Low temperature preservation of mouse fetal germ cells at 4°C" Theriogenology. 45. 1029-1035 (1996)

Y.Kato：“小鼠胎儿生殖细胞在 4°C 下的低温保存”Theriogenology 45. 1029-1035 (1996)。

K.Ohkoshi: "Effects of freezing and thawing on the development of enucleated bovine oocytes following nuclear transfer" Anim. Sci. Technol. (Jpn.). 68. 7-12 (1997)

K.Ohkoshi：“冷冻和解冻对核移植后去核牛卵母细胞发育的影响”动画。

H.Takano: "Effects of cell cycle stage of donor nuclei on the development of bovine nuclear transfrerred embryos" J. Reprod. Cev.42. 61-65 (1996)

H.Takano：“供体细胞核的细胞周期阶段对牛核移植胚胎发育的影响”J. Reprod。