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海産緑藻の特異な細胞再生現象に機能する内在性蛋白質の会合体形成機構の解明

阐明在海洋绿藻独特的细胞再生现象中起作用的内源蛋白的组装形成机制

基本信息

批准号：
18658084
负责人：
堀貫治
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

緑藻ハネモ類を含む海産の多核単細胞性緑藻は特異な再生機能をもつことが知られている。すなわち、海水中に流れ出た細胞内オルガネラから細胞を再生することができる。この現象の分子機構の全容が明らかになれば、「人工細胞の構築」や「新規の遺伝子導入法の開発」などが可能となる。本研究ではハネモ属緑藻を対象として、細胞内容物からの細胞再構築現象に鍵化合物として機能する57kDa糖蛋白質(BPL-54)と17kDa蛋白質(BPL-17)の生理条件下での相互作用および会合体形成機構を明らかにすることを目的とした。本年度の当初実施計画では、ハネモBryopsis plumosaの2種レクチン、BPL-54とBPL-17を用いて、その複合体形成ならびに会合体形成の機構を解析する予定であった。しかし、同藻の試料量が少なく、解析に必要な精製レクチン量を得ることができなかった。そこで、十分量のハネモ属レクチンを得るために、両レクチンの大腸菌発現系を構築して安定調製法を確立することにした。また、同様の細胞再生機能を有するネザシハネモB.corticulansから類似レクチン、BCL-54とBCL-17の精製を行った。その結果、BPL-17については、作成した発現コンストラクトをBL21株に導入し、得られた組換え体(融合蛋白質)を封入体として回収後、His/rBPL-17として精製した。これをリフォールディングし、最終的にrBPL-17を培養液250mlあたり3.5mgの収量で得た。本組換え体の糖鎖結合特異性および分子量が天然由来のものと一致することを確認した。BPL-54についても同様の手法を用いて活性組換え体を得たが、低収量であった。一方、ネザシハネモの天然藻体から、BCL-54およびBCL-17を比較的高収量で得た。今後、新たに調製した上記レクチンを用いて、当初計画を実行する予定である。

Green algae contain marine multinucleated single-celled green algae with specific regenerative functions.すなわち、Sea water flows out of the cells and regenerates the cells inside the cells.このphenomenon's molecular mechanism's full capacity が明らかになれば, "artificial cell's construction" and "new rule's legacy vine introduction method の开発" などがpossible and となる. In this study, the green algae を対 resembles として, the cell content からのcell remodeling phenomenon and the key compound として function 57kDa glycoprotein (BPL) -54) The 17kDa protein (BPL-17) interacts and forms a complex under physiological conditions. This year's original implementation plan, Hiropsis Bryopsis Plumosa's 2 kinds of レクチン, BPL-54 and BPL-17を use いて, その complex formation ならびに assemble the body to form the mechanism を analysis する predetermined であった. The amount of sample is small, and the amount of sample required for analysis is small, and the amount of refined sample is necessary for analysis.そこで, 十分のハネモ belong to レクチンをget るために, 両レクチンThe present system of coliform bacteria has established a stable and stable preparation method. It has the same cell regeneration function as B. corticulans, similar to BCL-54 and BCL-17. The results of その, BPL-17 については, 成した発成コンストラクトをBL21 strain に Imported し, 得らHis/rBPL-17 was purified after the modified body (fusion protein) was sealed and recovered.これをリフォールディングし, the final にrBPL-17を culture medium 250ml and the yield of 3.5mg was obtained. In this group, the binding specificity of the sugar lock and the molecular weight of the natural origin are consistent and confirmed. BPL-54 uses the same technique as the active ingredient to replace the active ingredient with the active ingredient, and the low-yield ingredient is the best ingredient. It has a high yield in comparison with the natural algae of Nikasa and BCL-54 and BCL-17. From now on, the new たに-modified した will be recorded as the レクチンを use いて, and the original plan を実行する will be determined である.