2種類のプロモーターで制御可能なTRECK法(DPD-TRECK法)の開発

开发可通过两种启动子控制的TRECK方法（DPD-TRECK方法）

• 批准号: 19650109
• 负责人: 米川 博通
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650109/
• 关键词: 標的細胞ノックアウト法; TRECK法; CD4細胞; CD8細胞; 組換えBAC; BAC-トランスジェネシス; Cre; loxPシステム; Tgマウス; T細胞; 二重制御系; 細胞機能

TRECK(Toxin Receptor mediated Cell Knockout)法はマウスがジフテリア毒素(DT)非感受性であることを利用し、ヒトのDT受容体(DTR)を標的細胞特異的に発現するTgマウスを作製し、DT投与によりその標的細胞だけに傷害を与える方法である。本研究では、これまでは1種類のプロモーターで規定される細胞系列に限定されていたTRECK法を2種類のプロモーターで制御可能な系に改良することを試みた。その方法として、DTR発現系とCre発現系とを利用し、細菌人工染色体(BAC)との相同組換え系(BAC Recombineering)による2種類の組換えBACを用いることにより、従来のTRECK法を改良することにした。その結果、CD4プロモーターの下流にlox配列に挟まれたカナマイシン耐性遺伝子(kana^R)-DTR cDNA、およびCD8プロモーターの下流にCre cDNAを導入した2種類のコンストラクトを得た。それらはPCR、塩基配列解析やパルスフィールド電気泳動法による解析後、マイクロインジェクション法を用いてC57BL/6J系統の前核期受精卵に導入しトランスジェニックマウス(Tg)を作製した。その結果、CD4-DTR-Tgにおいては2系統、CD8-Cre-Tgにおいては6系統のマウスを得ることができた。現在これらのTgマウスの発現解析を行い、その後ダブルTgを樹立することにより,本システムの実効性を検討する予定である。

TRECK(Toxin Receptor mediated Cell Knockout) method は マ ウ ス が ジ フ テ リ ア toxin (DT) susceptibility で あ る こ と を using し, ヒ ト の DT cells by let body (DTR) を bid specific に 発 now す る Tg マ ウ ス を し, DT cast and に よ り そ の target cells だ け に damage を and え る method で あ る. This study で は, こ れ ま で は 1 species の プ ロ モ ー タ ー で rules さ れ る cell series に qualified さ れ て い た - TRECK を 2 kinds の プ ロ モ ー タ ー で suppression may have な department に improved す る こ と を try み た. そ の way と し て, DTR 発 now と Cre 発 now is と を using し, bacterial artificial chromosome (BAC) と の in same group え system (BAC Recombineering) に よ る の group in え BAC を 2 species use い る こ と に よ り, 従 の を - TRECK method improved す る こ と に し た. そ の results, CD4 プ ロ モ ー タ ー の obscene に lox match column に carry ま れ た カ ナ マ イ シ ン patience heritage 伝 child (kana ^ R) - DTR cDNA, お よ び CD8 プ ロ モ ー タ ー の obscene に Cre cDNA を import し た 2 kinds の コ ン ス ト ラ ク ト を た. そ れ ら は PCR, salt base with column analysis や パ ル ス フ ィ ー ル ド 気 swimming method に よ る parsed, マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ を ン method with い て in C57BL / 6 j system の pronucleus stage a fertilized egg に import し ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス (Tg) を cropping し た. そ の results, CD4 - DTR - Tg に お い て は 2 system, CD8 - Cre - Tg に お い て は 6 system の マ ウ ス を must る こ と が で き た. Now こ れ ら の Tg マ ウ ス の 発 now parse を い, そ の after ダ ブ ル Tg を set す る こ と に よ り, this シ ス テ ム の be sharper sex を beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

2種類のプロモーターで制御可能なTRECK法(DPD-TRECK法)の開発

开发可通过两种启动子控制的TRECK方法（DPD-TRECK方法）

• 发表时间: 2009
• 作者: 山口潤也;米川博通
• 通讯作者: 米川博通

標的細胞ノックアウト法のための組織特異的BAC発現ベクターの開発とその応用.

用于靶向细胞敲除方法的组织特异性 BAC 表达载体的开发及其应用。

• 发表时间: 2007
• 作者: 柴田 康佑;他
• 通讯作者: 他

標的細胞ノックアウト法のための組織特異的BAC発現ベクターの開発とその応用

靶向细胞敲除法组织特异性BAC表达载体的研制及其应用

• 发表时间: 2007
• 作者: 柴田 康佑;他
• 通讯作者: 他