分泌型リソソームを保持したT細胞ハイブリドーマの作製法と機能解析法の開発

含有分泌型溶酶体的T细胞杂交瘤的制备方法和功能分析方法的开发

• 批准号: 19658040
• 负责人: 片岡 孝夫
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19658040/
• 关键词: 細胞・組織; 免疫学; バイオテクノロジー; プロテオーム; ナチュラルキラー細胞; LAMP-1; 細胞傷害顆粒

C57BL/6マウスより単離した脾臓細胞をコンカナバリンAで3日間刺激した。この幼若化したT細胞よりトータルRNAを調製し、オリゴdTを用いた逆転写反応によって、cDNAライブラリーを作製した。それを鋳型として、制限酵素配列(EcoRI、XhoI)を連結した一対のプライマーによって、T-bet遺伝子およびEomesodermin遺伝子の全長をPCRで増幅した。これらのPCR産物をN末端にFLAGタグを連結できる動物細胞用発現ベクター(CMVプロモーター、ネオマイシン耐性遺伝子)にクローニングした。DNA塩基配列解析を行い、変異のないT-bet遺伝子とEomesodermin遺伝子であることが確認された。ヒト胚性腎293T細胞に一過的に発現させ、抗FLAG抗体によるウェスタンブロッティングを行ったところ、予想される分子量にT-betタンパク質およびEomesoderminタンパク質が検出された。さらに、FLAG-T-bet遺伝子を3つの動物細胞用発現ベクター(SRαプロモーター・ピューロマイシン耐性遺伝子、EF-1αプロモーター・ピューロマイシン耐性遺伝子、EF-1αプロモーター・ハイグロマイシン遺伝子)にサブクローニングし、FLAG-Eomesodermin遺伝子を2つの動物細胞用発現ベクター(SRαプロモーター・ピューロマイシン耐性遺伝子、EF-1αプロモーター・ピューロマイシン耐性遺伝子)にサブクローニングした。FLAG-T-bet遺伝子、およびFLAG-Eomesodermin遺伝子をマウスT細胞リンパ腫BW5147細胞に安定的に発現させるために、ピューロマイシンおよびハイグロマイシンのBW5147細胞に対する感受性を検討した。その結果、BW5147細胞は、ピューロマイシン0.5μg/mlおよびハイグロマイシン1.5mg/ml以上でほぼ完全に死滅すること確認された。

C57BL/6 is A natural immune system. This is the first time that T cells have been modified. The PCR amplification of the full-length of the T-bet gene and Eomesodermin gene was carried out by linking the two enzymes (EcoRI, XhoI). This PCR product is linked to the N-terminal FLAG tag and is used in animal cell development. DNA sequence analysis is carried out in different ways, such as T-bet gene and Eomesodermin gene. The development of embryonic kidney 293T cells, anti-FLAG antibody, and molecular weight of T-bet protein and Eomesodermin were investigated. FLAG-T-bet gene is used in animal cell development.(SRα $>$>(SRα ρ ο τFLAG-T-bet gene, FLAG-Eomesodermin gene, As a result, BW5147 cells were confirmed to be completely killed when the concentration of BW5147 was higher than 0.5μg/ml.

项目成果

Bioactive triterpene saponins from the roots of Phytolacca americana

• DOI: 10.1021/np078012m
• 发表时间: 2008-01-01
• 期刊: JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS
• 影响因子: 5.1
• 作者: Wang, Liyan;Bai, Lin-Ting;Ando, Masayoshi
• 通讯作者: Ando, Masayoshi

ERK and p38 MAP kinase are involved in downregulation of cell surface TNF receptor 1 induced by acetoxycycloheximide

• DOI: 10.1016/j.intimp.2008.02.010
• 发表时间: 2008-06-01
• 期刊: INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Ogura, Hirotsugu;Tsukumo, Yoshinori;Kataoka, Takao
• 通讯作者: Kataoka, Takao

Ferrochelataseの転写後調節の機能解析

亚铁螯合酶转录后调控的功能分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 田中 重光;人村 敏志;中山 二郎;Vita Ratri Cahyani;Kimiko Kadohara;Hirotsugu Ogura;Na Li;Ming Zhao;Ming Zhao;横道公伸;松尾健太郎;山田有理子;片岡孝夫;後藤紗希;境野眞善
• 通讯作者: 境野眞善

カスパーゼ8とc-FLIPによる転写因子NF-κBシグナル伝達の制御機構の解析

Caspase 8和c-FLIP对转录因子NF-κB信号传导的调控机制分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 風見;紗弥香;松尾 健太郎
• 通讯作者: 松尾 健太郎

The ursane-, oleanane-, dammarane-, lupane-, and taraxasterane-type triterpenes isolated from Nerium oleander and their biological activities.

• 发表时间: 2007
• 作者: Zhao Ming;Fu Liwei;L. Na;Tang Wanxia;L. Minjie;Toshiaki Hasegawa;H. Ogura;T. Kataoka;K. Hirose;M. Ando;J. Govil;V. Singh;R. Bhardwaj