生体反応を利用した抗体の細胞内導入法の開発

开发利用生物反应将抗体引入细胞的方法

• 批准号: 17658048
• 负责人: 片岡 孝夫
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658048/
• 关键词: グランザイムB; c-Fos; c-Jun; AmCyan; DsRed-Monomer; ナチュラルキラー細胞; パーフォリン

パーフォリン(孔形成タンパク質)およびグランザイムB(セリンプロテアーゼ)を動物細胞に添加することによって、グランザイムBが細胞外からサイトソルへ移行し、プログラム細胞死を誘導することが報告されている。本研究では、FRET(fluorescent resonance electron transfer)法を用いて、グランザイムBの細胞外からサイトソルヘの移行を検出できる実験系の構築を目的とした。FRET法に用いる蛍光タンパク質として、シアン蛍光タンパク質(AmCyan)および赤色蛍光タンパク質(DsRed-Monomer)を選択した。転写因子であるFosファミリーやJunファミリーは、分子内にbZIP(basic-region leucine zipper)モチーフを有し、ヘテロ二量体を形成することができる。FosファミリーおよびJunファミリーからマウスc-Fosおよびマウスc-Junを選び、bZIPモチーフ(35アミノ酸残基)をPCRで増幅し、DsRed-MonomerのN末側にクローニングした。さらに、AmCyanのN末側にc-Fosおよびc-JunのbZIPモチーフを挿入した発現ベクターを構築した。グランザイムBは、サイトソルへ移行するとプログラム細胞死を誘導するため、プロテアーゼ活性中心のセリン残基をアラニン残基に置換(Ser195→Ala195)した不活性型グランザイムBを作製した。また、野生型および不活性型グランザィムBから、シグナル配列およびジペプチド配列を除去した欠失変異体をそれぞれ作製した。さらに、野生型グランザイムB、不活性型グランザイムB、並びに野生型と不活性型グランザイムBの欠失変異体(シグナル配列とジペプチド配列を除去)をc-Fos-DsRed-Monomerおよびc-Jun-DsRed-MonomerのN末側に挿入した発現ベクターを構築した。

パーフォリン(pore forming material) およびグランザイムB(セリンプロテアーゼ)をAnimal cellにaddedすることによって、グランザイムBが extracellular からサイトソルへし、プログラム Cell death を inducing することが report されている. In this study, FRET (fluorescent resonance electron transfer) method is used, and the extracellular structure of the extracellular structure of the transfer method is used. The FRET method uses AmCy an)および红蛍光タンパク性(DsRed-Monomer)を选択した.転WRITING FACTOR であるFosファミリーやJunファミリーは, intramolecular にbZIP (basic-region leucine zipper) モチーフを有し, ヘテロtwo-dimensional body をformed することができる. FosファミリーおよびJunファミリーからマウスc-Fosおよびマウスc-Junを选び、bZIPモチーフ (35アミノ acid residue) を PCR で amplification し, DsRed-Monomer の N-terminal にクローニングした.さらに、AmCyanのN端lateralにc-Fosおよびc-JunのbZIPモチーフをINSERT した発行ベクターをconstruct した.グランザイムBは, サイトソルへ migrated するとプログラムcell death inducing するため, プロテアーゼactive center のセThe inactive type of グランザイムBを is produced by replacing the リン residue をアラニン residue (Ser195→Ala195).また, wild type および inactive type グランザィムBから, シグナル arrangement The およびジペプチドmatching arrangement をremoves the した owes the loss of the divergent body をそれぞれmakes した.さらに, wild type グランザイムB, inactive type グランザイムB, and びに wild type Inactive type of グランザイムB variantをRemove)をc-Fos-DsRed-Monomerおよびc-Jun-DsRed-MonomerのNlateralにINSertした発existingベクターをconstructした.

项目成果

Three new Triterpenes from Nerium oleander and biological activity of the isolated compounds

• DOI: 10.1021/np040072u
• 发表时间: 2005-02-01
• 期刊: JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS
• 影响因子: 5.1
• 作者: Fu, LW;Zhang, SJ;Ando, M
• 通讯作者: Ando, M

Bioactive guaianolides from siyekucai (Ixeris chinensis).

• DOI: 10.1021/np068015j
• 发表时间: 2006-10
• 期刊: Journal of natural products
• 影响因子: 5.1
• 作者: Shu-jun Zhang;Ming Zhao;L. Bai;Toshiaki Hasegawa;Jin-lan Wang;Liyan Wang;Hongyan Xue;Qi-gang Deng;F. Xing;Yuhua Bai;J. Sakai;Jiao Bai;R. Koyanagi;Yoshinori Tsukumo;T. Kataoka;K. Nagai;K. Hirose;M. Ando

Acetoxycycloheximide (E-73) rapidly induces apoptosis mediated by the release of cytochrome c via activation of c-Jun N-terminal kinase

Acetoxycycloheximide (E-73) 通过激活 c-Jun N 末端激酶，快速诱导细胞色素 c 释放介导的细胞凋亡

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochemical Pharmacology 69
• 作者: Y.Fujikawa et al.;Ming Zhao;Shujun Zhang;Liwei Fu;Kimiko Kadohara
• 通讯作者: Kimiko Kadohara

Taraxasterane- and ursane-type triterpenes from Nerium oleander and their biological activities

• DOI: 10.1021/np0680073
• 发表时间: 2006-08-25
• 期刊: JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS
• 影响因子: 5.1
• 作者: Zhao, Ming;Zhang, Shujun;Ando, Masayoshi
• 通讯作者: Ando, Masayoshi

RKTS-33 an epoxycyclohexenone derivative that specifically inhibits Fas ligand-dependent apoptosis in CTL-mediated cytotoxicity

RKTS-33 一种环氧环己烯酮衍生物，可特异性抑制 CTL 介导的细胞毒性中 Fas 配体依赖性细胞凋亡

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 69(10)
• 作者: Jian-lin Wu;Tomokazu Mitsui
• 通讯作者: Tomokazu Mitsui