权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

液胞型プロトンATPase阻害剤を用いた細胞傷害性T細胞の機能解析

使用液泡质子 ATP 酶抑制剂对细胞毒性 T 细胞进行功能分析

基本信息

批准号：
07760078
负责人：
片岡孝夫
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞傷害性T細胞(CTL)はパ-フォリン依存性およびFas依存性の細胞傷害性経路の2つの主要な経路により標的細胞を殺傷することが最近の研究から明らかとなっている。液胞型プロトンATPase阻害剤であるコンカナマイシンA(CMA)は、主として細胞傷害顆粒内のpHを増加させることによりパ-フォリンの分解を誘導しパ-フォリン依存性の細胞傷害経路をほぼ完全にブロックすることを明らかとしている。しかしながら、Fas依存性経路により標的細胞を殺傷するCD4^+CTLクローンやパ-フォリン欠損マウス由来のCD8^+CTLクローンを用いた場合、CMAはこれらの細胞内の酸性化を阻害し細胞傷害顆粒の形態変化を顕著に誘導したが、細胞傷害活性をほとんど阻害しなかった。アロ抗原特異的なCTLを種々の方法で誘導しCMAの効果を検討したところ、1prマウス由来の標的細胞やFas低発現あるいはネガティブの腫瘍細胞に対する細胞傷害活性はほぼ完全に阻害された。一方、ノーマルマウス由来の標的細胞やFasポジティブな腫瘍細胞に対する細胞傷害活性は高濃度のCMAを用いても有意な細胞傷害活性が残存した。gldマウス由来のアロ抗原特異的なCD8^+CTLの細胞傷害活性はCMAによりほぼ完全に阻害された。さらにCD8^+CTLクローンによるCMA非感受性の細胞傷害活性は可溶性のFas分子により完全に阻害された。以上より、CMA非感受性の細胞傷害経路はFas依存的であることが明らかとなった。ブレフェルジンAはFas依存性の細胞傷害性経路をブロックしたが、パ-フォリン依存性経路は部分的にしか阻害しなかった。さらに、CMAとブレフェルジンAを同時に添加したところ、アロ抗原特異的なCTLの細胞傷害活性は完全に阻害された。以上の結果より、CMAはCTLによる2つの主要な細胞傷害経路の関与を研究するのに非常に有用なプロープであることが明らかとなった。

Cytotoxic T cells (CTL) are dependent on Fas-dependent cell-toxic pathways.の2つのMain target cells are killed and killed. Recent research has been carried out. Liquid cell type ATPase inhibits the action of CMA (CMA), which injures cells in the granules and increases the pH in the granules. Decomposition of とによりパ-フォリンのinducing しパ-フォリンdependence details Cell damage 経路をほぼ全にブロックすることを明らかとしている.しかしながら、Fas-dependent 経路によりtarget cell をkillするCD4^+C TLクローンやパ-フォリン无码マウス originのCD8^+CTLクローンWhen used, CMA can inhibit acidification in cells, change the shape of cell-damaging particles and induce cell-damaging activity, and inhibit cell-damaging activity.アロantigen-specific なCTL をkind 々の method で induction し CMA の effect を検したところ, 1pr マウス origin の standard The cell damage activity of the cells is reduced and the cell damage activity is completely blocked. On the one hand, the target cells derived from the ノーマルマウスのFasポジティブなtumor cells have a cell-damaging activity and a high concentration of CMA is used and the cell-damaging activity is not retained. The cell-damaging activity of CD8^+CTL derived from gldマウスのアロロantigen-specific and CMA's complete blocking of cell damage activity.さらにCD8^+CTL クローンによるCMA insensitive cell damage activity and soluble Fas molecule completely block the damage. The above より, CMA non-sensitive cells damage the であることが明らかとなった which depends on the 経路はFas.ブレフェルジンAはFas-dependent cell damage pathwayたが, パ-フォリンdependency 経路は part of the にしか hinders しなかった. The cell damage activity of さらに and CMA とブレフェルジンAを is added at the same time as したところ and アロantigen-specific なCTL, which completely blocks the cell damage activity. The above results show that the CMA and CTL test results are mainly related to cell damage. It is very useful to study the するのにになプロープであることが明らかとなった.