权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

血管内皮障害のプロテオーム解析

血管内皮疾病的蛋白质组学分析

基本信息

批准号：
19659062
负责人：
岩尾洋
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659062/
关键词：
血管内皮内皮障害プロテオミクス Akt タンパク質間相互作用

项目摘要

メタボリック症候群の病態形成時には非常に多くの遺伝子産物が複雑に絡み合い相互作用している。よって本研究は、そのキー分子であるAktに着目し、メタボリック症候群の病態形成をAkt会合分子の変化という観点からプロテオミクスにて明らかにすることを目的とした。平成20年度はAkt-TAPおよびAkt-strep組換えアデノウイルスをラット血管内皮細胞に発現させ、高グルコース濃度、アンジオテンシンII受容体拮抗薬、長時間作用型Ca拮抗薬存在下で培養することで刺激に応じたAkt会合タンパクの変化を解析した。Akt-TAPについてはカルモジュリンビーズ、IgGビーズの二段階精製、Akt-strepについてはstrep-TactinにてAkt会合タンパク質をアフィニティー精製した。精製後に、SDS-PAG/銀染色を行い、会合分子のパターンの違いを比較した。さらに、バンドをゲル内トリプシン消化し、MALDI-TOF型質量分析計にて順次、同定した。複数の会合分子の変化を認めたが、変化するバンドほど量が少なく、同定に至らなかった。年度途中より安定同位体による標識とnanoLC/MS/MSを使用した同定を新たに始めたが、現段階では有効な結果は得られていない。以上、刺激に依存したAkt複合体の変化を分子レベルで同定することについては十分な結果を得ることができなかった。この理由としてAktの基質に対する結合が一過性であり、Akt複合体の維持が十分でなかった可能性が示唆される。それに対して、Aktキナーゼ活性欠失型変異体の作製や架橋剤の使用を検討したが解決には至らなかった。一方で、恒常的に結合している分子の同定には成功し、タンパク質相互作用から生理現象を説明するという本法はbait分子の選択によっては十分機能すると考察した。今後、baitを変更して本法によるネットワーク解析を継続する。

There are many genetic products involved in the pathogenesis of the syndrome, and they interact with each other. The purpose of this study is to investigate the pathogenesis of Akt syndrome. In the 20th year of Heisei, Akt-TAP and Akt-strep groups were used to analyze the development of vascular endothelial cells, high concentration of calcium, calcium II receptor antagonists, and long-acting calcium antagonists. Akt-TAP After purification, SDS-PAG/silver staining is performed, and the molecular composition is compared. The MALDI-TOF mass analyzer was designed for sequential and simultaneous analysis. The number of convergent molecules is determined by the number of molecules. In the middle of the year, the nanoLC/MS/MS is used for the same purpose, and the current stage is used for the same purpose. The above stimuli are dependent on Akt complex and the molecular changes are consistent with each other. The reason for this is that Akt matrix binding is transient and Akt complex maintenance is highly probable. For example, if you want to solve the problem, you can use the method of making bridge to solve it. The molecular identity of a single, constant binding molecule is successfully explained by the molecular interaction of a single, constant binding molecule. In the future, if bait changes, we will continue to analyze existing websites under this law.