RNA結合タンパクの局在と口腔がんの悪性度

RNA结合蛋白的定位与口腔癌的恶性肿瘤

基本信息

批准号：
19659517
负责人：
東野史裕
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659517/
关键词：
HuR 悪性度 E4orf6 c-fos c-myc 核外輸送安定化 ARE-mRNA アデノウイルス

项目摘要

AU(アデニン-ウラシル)-rich element (ARE)はc-fos、 c-myc、 COX-2などの細胞の増殖に関わる遺伝子のmRNAに存在し、AUUUAをコアとする繰り返し配列から成る領域である。我々はアデノウイルスのがん遺伝子産物E4orf6がARE-mRNAを核外輸送・安定化することにより細胞をがん化することをこれまでに見出している。E4orf6は発がんのみならず、がん細胞の悪性化に関わるタンパクでもありE4orf6によるARE-1nRNAや同時に輸送されるHuRの輸送は、細胞のがん化やがんの悪性化の指標となりうる。本研究の目的は口腔がん細胞でHuRタンパクの細胞質への局在と、そのがん細胞の悪性度との関連を調べ、HuRの局在が口腔がん細胞の悪性度の指標になるか検討することである。口腔がん組織を用いて、HuRタンパクの局在を検討した。まず、HSC-3やCa9.22などの口腔がん培養細胞を用いてセルブロックを作成し、免疫染色の条件検討を行つた。次に、この染色条件で、手術材料から得られた切片を用いてHuRの免疫染色を行うによりHuRの局在を検討した。その結果、がん組織の細胞では細胞質側にもHuRタンパクが存在することがわかり、これに対して正常組織の細胞では主に核のみにHuRが局在していることが判明した。また、白板症の患者から得られたサンプルを用いて同様の検討を行つたところ、まだサンプル数は不十分であるが、予後不良のサンプルについてはHuRが核外輸送されていることも確認された。さらに、培養細胞を用いて、c-fos、 c-myc、 COX2などのARE-mRNAの局在をin situ hybridization法で検討しところ、がん細胞ではこれらのmRNAが核外輸送されていることも明らかになった。以上の結果より、口腔がんでは、HuRやARE-mRNAが核外輸送されていることが明らかになり、HuRの局在が口腔がん細胞の悪性度の指標となりうることがわかった.

Au（腺嘌呤 - 纯素） - 富含元素（AS）在与细胞增殖的基因的mRNA中，例如C-FOS，C-MYC和COX-2，是由以AUUUA为核心的重复序列组成的区域。我们以前已经发现，腺病毒癌基因产物E4ORF6可以通过核转运和稳定蛋白质-MRNA将细胞转化为癌症。 E4ORF6不仅是参与癌细胞恶性肿瘤的蛋白质，并且由E4ORF6同时运输的Are-1nRNA和HUR的运输可以是细胞癌和恶性癌细胞率的癌症转移的指标。这项研究的目的是研究HUR蛋白在口腔癌细胞中的细胞质定位与癌细胞的恶性肿瘤之间的关联，并确定HUR定位是否是口腔癌细胞恶性肿瘤的指标。使用口腔癌组织研究了HUR蛋白的定位。首先，使用培养的口服癌细胞（例如HSC-3和CA9.22）制备细胞块，并检查了免疫染色的条件。接下来，在这种染色条件下，通过使用手术材料获得的部分进行免疫染色来检查HUR的定位。结果，发现HUR蛋白也存在于癌组织细胞的细胞质一侧，并且HUR主要位于正常组织细胞中的细胞核中。此外，使用从白细胞的患者获得的样品进行了类似的研究，尽管样品数量仍然不足，但证实HUR对于预后较差的样品进行了核外出来。此外，使用原位杂交方法研究了使用培养细胞的Are-MRNA（例如C-FOS，C-MYC和COX2）的定位，还发现这些mRNA在癌细胞中核转运。以上结果表明，HUR和ARE-MRNA在口腔癌中是核外出来的，发现HUR的定位可能是口腔癌细胞恶性肿瘤的指标。