ウイルスタンパクによるCRM1非依存的なARE-mRNAの核外輸送

病毒蛋白对 ARE-mRNA 进行不依赖于 CRM1 的核输出

• 批准号: 17026002
• 负责人: 東野 史裕
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026002/
• 关键词: アデノウイルス; E4orf6; AU-rich element; pp32; HuR; アデノウィルス; CRM1

E4orf6はアデノウイルス感染時に宿主細胞やウイルスのmRNAの輸送を制御し、細胞がん化活性も持つウイルスタンパクである我々はこれまでにE4orf6がpp32とめ結合を介して、本来CRM1依存的に核外輸送されるAU-rich element containing mRNA( ARE-mRNA)をCRM1非依存的に輸送することを報告した。またE4orf6のoncodomainがARE-mRNAの輸送や安定化に重要な働きを持ち細胞がん化に寄与していることを解明した。その後E4orf6のこの機能は、アデノウイルス感染時のmRNAの輸送やウイルス複製に何らかの機能を持っていると考え、いくつかの解析を行った。まずアデノウイルス感染細胞でもE4orf6とpp32やHuRが結合しているか調べた。その結果がん細胞同様、感染細胞でもこれらのタンパクが結合することがわかった。次に同じ感染細胞ではHuRが標的のmRNAと共に細胞質側に輸送されていることをUV cross link法を用いて見出した。さらに同細胞ではc-fosなどのARE-mRNAも核外輸送されていた。これらの現象はE4orf6を欠失したアデノウイルスを感染した細胞では起こらなかった。またRNAi法によりHuRをノックダウンすると、たとえE4orf6が細胞に存在してもARE-mRNAの核外輸送が阻害され、ARE-mRNAに直接結合するHuRが核外輸送に必須であることがわかった。そしてHuRをノックダウンすると、ウイルス粒子の産生効率も落ちることが判明した。以上の結果は、アデノウイルス感染細胞でもARE-mRNAが核外に輸送されており、HuRを介したARE-mRNAの核外輸送がウイルス粒子の産生に重要であることを示唆している。

E4ORF6调节腺病毒感染期间宿主细胞和病毒mRNA的运输，是一种病毒蛋白，也具有细胞致癌活性。我们以前已经报道过E4ORF6在CRM1依赖性的方式中含有含有mRNA的E4ORF6含有富含AU的元素（ARE-MRNA），它最初是通过Pph 2结合的。我们还澄清说，E4ORF6 ONCODOMAIN在ARE-MRNA的运输和稳定中具有重要作用，并有助于细胞致癌。之后，我们认为E4ORF6的这种功能在腺病毒感染后的mRNA和病毒复制中具有一定作用，并进行了多次分析。首先，我们研究了E4ORF6，PP32和HUR是否与腺病毒感染的细胞结合。结果，发现这些蛋白质与感染细胞和癌细胞结合。接下来，使用UV交叉链路方法发现了HUR与同一感染细胞中的靶mRNA一起运输到细胞质侧。此外，在同一细胞中也将诸如C-FOS之类的re-mRNA核不是核外出来。这些事件没有发生在感染已删除E4ORF6的腺病毒的细胞中。此外，即使细胞中存在E4ORF6，使用RNAi方法敲低HUR也会抑制ARE-MRNA的核导出，并且发现直接与Ase-MRNA结合的HUR对于核出口至关重要。还发现，击倒HUR还降低了病毒颗粒的生产效率。上述结果表明，蛋白-MRNA在腺病毒感染细胞中的细胞核之外运输，并且通过HUR核转运对于生产病毒颗粒很重要。

项目成果

Genomic structure and promoter activity of the E1AF gene, a memeber of the ETS oncogene family.

E1AF 基因（ETS 癌基因家族成员）的基因组结构和启动子活性。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications 339
• 作者: 石田勢津子;他
• 通讯作者: 他

E1AF expression is closely correlated with malignant phenotype of tongue squamous cell carcinoma trough activation of MT1-MMP gene promoter.

E1AF表达通过MT1-MMP基因启动子的激活与舌鳞状细胞癌的恶性表型密切相关。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Oncology Reports 13
• 作者: 泉山ゆり;他
• 通讯作者: 他

Adenovirus E4orf6 targets pp32/LANP to control the fate of ARE-containing mRNAs by perturbing the CRM1-dependent mechanism.

• DOI: 10.1083/jcb.200405112
• 发表时间: 2005-07-04
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Higashino F;Aoyagi M;Takahashi A;Ishino M;Taoka M;Isobe T;Kobayashi M;Totsuka Y;Kohgo T;Shindoh M
• 通讯作者: Shindoh M