RNAiの応用による新しい口腔がん遺伝子治療のための基礎研究

利用 RNAi 进行新型口腔癌基因治疗的基础研究

• 批准号: 17659625
• 负责人: 東野 史裕
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659625/
• 关键词: RNAi; ETSファミリー; E1AF; 転移・浸潤; 癌細胞; ETS ファミリー; がん細胞

RNA interference(RNAi)法は細胞に導入された二本鎖RNA(short interfering RNA ; siRNA)が、それと同じ配列塗持つmRNAを破壊(ノックダウン)することで、遺伝子の機能解析に有効な方法として現在注目されている。ヒトの培養細胞でもこの技術が有効であることが証明されており、哺乳動物やヒトでの応用が期待されている。我々は転写因子E1AFをクローニングし、E1AFがマトリックスメタロプロテアーゼの転写を活性化し、がん細胞に浸潤・転移活性を与えることを報告してきた。本研究の目的は口腔がん細胞でE1AFの発現をノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために最も適したRNAiの技術を開発することである。まずE1AFノックダウン用のsiRNAの設計を行い、浸潤・転移活性の高い口腔がん細胞HSC3やfibrosarcomaのHT1080、前立腺がんのPC3もしくはE1AFを強制的に発現しているNIH3T3細胞にsiRNAを導入した。その結果siMAX(invitrogen社製)が最もsiRNAの導入効率が高く、E1AFのmRNAの減少効率が高いことが判明した。さらにこの方法でE1AFがノックダウンされたHT1080、HSC3などの細胞を用いてスクラッチ法により、細胞の運動能を検討した。その結果これらの細胞は、コントロールのsiRNA(ランダムsiRNA)を導入した細胞に比べて、運動能が低いことがわかった。この結果はE1AFを効率よくノックダウンできれば、がん細胞の浸潤・転移活性を抑制できる可能性を示している。これらのことは我々が検討したRNAi法が、口腔がん細胞でE1AFの発現を効率よくノックダウンし、その浸潤・転移活性を抑制するために適した技術であることを示唆している。

RNA interference(RNAi) method is used to introduce two kinds of short interfering RNA (siRNA) into cells. The technology of cell culture has been proved to be useful in mammals. E1 AF is the active factor for cell infiltration and migration. The aim of this study is to develop an optimal RNAi technique for inhibiting the development, invasion and migration of E1AF in oral cells. The design of siRNA for E1AF was carried out, and siRNA was introduced into NIH 3T3 cells with high infiltration and migration activity in HSC3, HT1080 and PC3 cells under E1AF stress. The results showed that siMAX(invitrogen system) was the most effective for siRNA introduction, and E1AF mRNA reduction was the most effective. This method was used to investigate the kinetic energy of HT1080 and HSC3 cells. As a result, siRNA was introduced into the cells and the motor energy was reduced. The results showed that E1AF activity could be inhibited by cell infiltration and migration. This is the first time that we've seen this.

项目成果

E1AF expression is closely correlated with malignant phenotype of tongue squamous cell carcinoma through activation of MT1-MMP gene promoter.

E1AF的表达通过MT1-MMP基因启动子的激活与舌鳞状细胞癌的恶性表型密切相关。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oncology Report 13
• 作者: Izumiyama Y.;Ohiro Y.;et al.
• 通讯作者: et al.

Adenovirus E4orf6 targets pp32/LANP to control the fate of ARE-containing mRNAs by perturbing the CRM1-dependent mechanism.

• DOI: 10.1083/jcb.200405112
• 发表时间: 2005-07-04
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Higashino F;Aoyagi M;Takahashi A;Ishino M;Taoka M;Isobe T;Kobayashi M;Totsuka Y;Kohgo T;Shindoh M
• 通讯作者: Shindoh M

E1AF degradation by a ubiquitin-proteasome pathway

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.12.045
• 发表时间: 2005-02-11
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Takahashi, A;Higashino, F;Shindoh, M
• 通讯作者: Shindoh, M

Genomic structure and promoter activity of the E1AF gene, a member of the ETS oncogene family

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.11.024
• 发表时间: 2006-01-06
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Ishida, S;Higashino, F;Yoshida, K
• 通讯作者: Yoshida, K