RNAインターフェレンスを用いた分子標的筋再生療法の確立

利用RNA干扰建立分子靶向肌肉再生疗法

• 批准号: 20650086
• 负责人: 松田 修
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20650086/
• 关键词: 再生医学; 遺伝子; 発現制御

筋芽細胞の分化・増殖を抑制するサイトカインを標的とし、その発現をRNA干渉(RNAi)技術を用いて特異的に制御する分子標的療法を開発し、長期臥床高齢者のリハビリテーションのための全く新しい筋肉の再生医療につなげることを目標とする研究を行った。このサイトカインに特異的なshort inter fering RNA (siRNA)(siC)を数種合成し、マウス筋芽細胞株に導入したところ、同遺伝子の有意な発現低下が認められ、また筋芽細胞の増殖能が亢進することが、real time RT-PCRとテトラゾリウム塩アッセイにて示された。in vivoでのsiCの効果を検討するために、マウス骨格筋へのsiRNA導入法に改変を加え、効率の向上を行った技術を用い、siCをマウス骨格筋にin vivo導入し、経時的にマウスを安楽死させ、筋肥大の指標として筋の断面積を測定した。さらに筋の収縮能の変化を評価する目的で、一定の電気パルスを与えたときの筋の収縮力を計測した。その結果、siRNAを導入しなかったマウスの筋、および非特異的siRNAを同様の手法で導入したものに比して、siCを投与した群では有意に筋断面積が増加し、このサイトカインの特異的サイレンシングにてin vivoで筋肥大が誘導できることが分かった。また収縮力がコントロールと比べて有意に増強していたことから、肥大筋が収縮能でも強まっていることが示された。また、得られた筋細胞を培養し種々のアッセイで解析することにより、さらに上記の所見をコンファームする結果が得られている。本研究の成果は、廃用性萎縮筋の肥大と増強が、サイトカインを標的とするRNAi分子標的療法にて生体内で可能なことを初めて示したものであり、長期臥床高齢者のリハビリテーションと筋の再生医療に全く新しい地平を開く可能性があるものとして期待できる。

RNA interference (RNAi) technology has been used to develop specific molecular target therapies for the inhibition of differentiation and proliferation of muscle cells, and to develop new regenerative medicine for patients with long-term bed hypertension. The specific short inter fering RNA (siRNA)(siC) was synthesized in several ways, introduced into the cell line, and the expression of the siC gene was intentionally reduced. siC gene expression in vivo was determined by siRNA gene expression in vivo, and the gene expression in vivo was determined by siRNA gene expression in vivo. For the purpose of evaluating the deformation of the tendon, a certain amount of electrical energy is measured. As a result, siRNAs were introduced into the muscle, and non-specific siRNAs were introduced in the same way. The specific siRNAs were introduced into the muscle in vivo, and the specific siRNAs were introduced into the muscle. The strength of the muscle was increased intentionally. The results of this study were as follows: The results of this study indicate that the possibility of increasing the hypertrophy and strength of atrophic tendons in vivo, targeting RNAi molecular therapy, and the possibility of developing new regenerative medicine for long-term bed-ridden patients with hypertension are expected.

项目成果

Induction of chondrogenic phenotype in synovium-derived progenitor cells by intermittent hydrostatic pressure

• 发表时间: 2008
• 作者: 阪尾 敬

Enhanced expression of interleukin-6, matrix metalloproteinase-13, and receptor activator of NF-kappaB ligand in cells derived from osteoarthrtic subchondral bone

骨关节炎软骨下骨来源细胞中白细胞介素 6、基质金属蛋白酶 13 和 NF-κB 配体受体激活剂的表达增强

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Orthop Sci. 13(3)
• 作者: Sakao K;et al.
• 通讯作者: et al.

Comparison of anti-rheumatic effects of local RNAi-based therapy in collagen induced arthritis rats using various cytokine genes as molecular targets

• DOI: 10.3109/s10165-008-0131-3
• 发表时间: 2009-04
• 期刊: Modern Rheumatology
• 影响因子: 2.2
• 作者: A. Inoue;Kenji A. Takahashi;O. Mazda;Y. Arai;M. Saito;T. Kishida;M. Shin-Ya;T. Morihara;H. Tonomura;K. Sakao;J. Imanishi;T. Kubo