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造血幹細胞ニッチとしてのヒト胎盤の役割

人胎盘作为造血干细胞生态位的作用

基本信息

批准号：
20659154
负责人：
杉山大介
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20659154/
关键词：
発生・分化血液胎盤幹細胞

项目摘要

本研究の目的は、マウス・ヒト胎盤造血幹細胞の性質と、それを取り囲むニッチによる造血幹細胞制御機構を解明する事である。1)マウス胎盤に存在する造血幹細胞の特徴各発生段階における胎盤造血幹細胞の分布を検討するため、抗c-Kit抗体及び抗CD34抗体を用いて免疫染色を行った。またフローサイトメトリーを用いて造血幹細胞集団であるCD31,CD34,c-kit陽性細胞群を純化し、Ki-67抗体で染色することにより細胞周期が動いているか検討した。更にこれら細胞を採取し、コロニーアッセイ法を用いて造血前駆細胞活性を評価した。造血幹細胞のクラスター数はE11.5に多く、その絶対数はE12.5に多いことがわかった。またE11.5に比べてE12.5の方が細胞周期に突入している細胞が少ないことがわかり、細胞の形態に関しては、E11.5の方がいびつな形態をとるなど明らかな違いがあることが判明した。またコロニーアッセイ法によりE12.5の方が造血前駆細胞を多く含むことがわかった。2)遺伝子改変マウス胎盤における造血活性c-Myb KOマウス胎仔における造血幹細胞クラスターは正常個体よりも多くの細胞が集塊を形成する像が認められたが、その意義は検証出来ていない。3)胎盤造血幹細胞ニッチの分子的基盤c-Kit陽性造血幹細胞クラスターを取り囲むニッチ細胞を採取し、細胞刺激因子の発現をreal-time PCRで検討した。TPO、G-CSFなどの発現は認められず、SCFのみが高値を示したことから、胎盤造血幹細胞の発生・増幅制御にはSCFが重要な事が示唆された。

In this study, the purpose of this study was to determine the nature of fetal hematopoietic cells, and to determine the mechanism of hematopoietic cell control. 1) the distribution of hematopoietic cells, anti-c-Kit antibody and anti-CD34 antibody were detected by immunostaining. The hematopoietic cell collection, CD31,CD34,c-kit cell population analysis and Ki-67 antibody staining were used to detect the cell cycle activity. The cell activity before hematopoiesis was detected by the method of hematopoietic prehematopoiesis. The number of hematopoietic cells was more than that of E11.5 and the number of hematopoietic cells was E12.5. The number of cells in E11.5 is less than that in E12.5. The number of cells in the cell cycle is less than that in E12.5. The number of pre-hematopoietic cells in the prescription of E12.5 is much higher than that of the control group. 2) the formation of a collection of hematopoietic cells, which means that the hematopoietic activity, c-Myb KO activity, hematopoietic activity, hematopoietic activity, 3) the genomic c-Kit of fetal hematopoietic cells and molecules of fetal hematopoietic cells were isolated from fetal hematopoietic cells, and real-time PCR was detected by cellular stimulating factor. TPO and G-CSF signs show that the symptoms are abnormal, the SCF signs are high, and the hematopoietic cells of the fetus are responsible for the control of important SCF events.