新規SOX9結合核蛋白質の機能解析

新型 SOX9 结合核蛋白的功能分析

• 批准号: 20659231
• 负责人: 秋山 治彦
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20659231/
• 关键词: Sox9; 核蛋白; 遺伝子改変マウス; 転写コンプレックス; 転写制御

Sox9発現細胞からAffymetrix社GeneChipでゲノムワイドスクリーニングにより得られた未知の新規遺伝子(仮称NF-V)はII型コラーゲン遺伝子4x48bpレポーター遺伝子およびSox9遺伝子とともにC3H10T1/2細胞に共発現させた際、Sox9遺伝子のレポーター遺伝子誘導活性を増強する核タンパクである。このNF-Vの生体内での、特に軟骨細胞での機能を明らかにするため、コンディショナルアレルをもつ遺伝子改変マウスの作製を試みた。しかし、NF-Vにはsplice variantが存在して、さらにそのsplice variantは軟骨分化およびII型コラーゲン遺伝子発現に対して抑制的に作用しNF-Vの機能と拮抗する事が明らかとなった。よってNF-V特異的に遺伝子を欠失させるためのコンディショナルアレルの作製が困難であるのが現状である。Sox9転写コンプレックス構成因子の探索のため軟骨細胞に発現している遺伝子より作製した発現ライブラリーを酵母two-hybrid法によりスクリーンングした。その結果いくつかの核タンパク質を同定した。これらの核内タンパク因子はC3H10T1/2細胞を用いたSox9との共発現系においてII型コラーゲン遺伝子4x48bpレポーター遺伝子の発現を亢進した。また免疫沈降法によりSox9と結合する事も明らかとなった。現在クロマチン免疫沈降法によってSox9やNF-VとII型コラーゲン遺伝子上で結合しているかどうかを検討中である。

一个未知的新型基因（暂定名称NF-V），该基因组通过Affymetrix Genechip筛选从SOX9表达SOX9细胞是一种核蛋白，可增强SOX9基因在C3H10T1/2中与II型胶原基因4X48BP Reporter and SOXERETER and SOXENE的基因诱导基因诱导基因诱导的基因诱导活性。为了阐明该NF-V在体内的功能，特别是在软骨细胞中，我们尝试创建具有条件等位基因的转基因小鼠。然而，NF-V中有一个剪接变体，并且已经揭示了剪接变体对软骨分化和II型胶原基因表达的抑制作用，使NF-V的功能拮抗。因此，目前很难在NF-V中产生有条件的等位基因来删除基因。为了搜索Sox9转录复合物成分，使用酵母双杂交方法筛选了从软骨细胞中表达的基因产生的表达式库。结果表明，确定了几种核蛋白。这些核蛋白因子使用C3H10T1/2细胞在与SOX9的共表达系统中增强了II型胶原基因4x48bp报告基因的表达。还揭示了它通过免疫沉淀与SOX9结合。目前，使用染色质免疫沉淀来研究SOX9和NF-V是否与II型胶原蛋白基因结合。