筋形成過程における収縮性蛋白質の集合制御の分子機構

肌生成过程中收缩蛋白组装控制的分子机制

• 批准号: 01480024
• 负责人: 大日方 昂
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01480024/
• 关键词: 筋原繊維形成; 骨格筋; アクチン; cDNA; アクチン調節蛋白質; 筋発生

1.幼若筋のアクチン調節蛋白質(ADFとコフィリン)の構造決定:コフィリンはpH依存的なアクチン集合制御因子、ADFはpH非依存的なアクチン脱重合因子で、ともに幼若筋で働く。これらの構造と役割をさらに理解するために、鶏胚骨格筋から得たmRNAに対するλgtllcDNAライブラリ-より各蛋白質の全アミノ酸配列に相当するcDNAを、それぞれに対する特異抗体を用いてクロ-ニング、その全塩基配列を決定した。塩基配列から知られる蛋白質の一次構造はコフィリンでは166アミノ酸残基、ADFでは165残基である。今回決定されたニワトリ骨格筋コフィリンのアミノ酸配列は、既に決定されたブタ脳のコフィリンの場合と80%のホモロジ-を示した。また両蛋白質のアクチン重合への効果には顕著な差があるにも拘らず、両者のアミノ酸配列には高い(約70%)のホモロジ-が認められた。また、両蛋白質の一次構造にはSV40T抗原でしられている核移行シグナル、トロポミオシンとの共通配列、他のアクチン結合蛋白質(ゲルゾリン、プロフィリン、フラグミン)と相同な配列が存在した。両蛋白質の機能的な違いが一次構造上のどの部位に規定されるか更に検討中である。2.筋発生過程での発現変化:ADFは筋の成熟につれその発現は低下するが、コフィリンは成熟筋でも発現は持続することがわかった。3.細胞内での蛋白質の存在パタ-ン: 蛍光抗体法により検討した。コフィリン、ADFとも通常の培養筋細胞では主に細胞質に拡散している。筋管細胞をDMSO処理すると、筋細胞質に存在したコフィリンは核内に移行しアクチンとともに顕著なロッド状構造を形成するのが認められた。さらに、コフィリンは伸長期の筋細胞の末端に集合、また熱ショックを受けた筋細胞でアクチンとともに顆粒状構造に集合など多彩な振舞をするのに対し、ADFは常に細胞質に拡散して存在した。

1. If a young jin の ア ク チ ン regulating protein (ADF と コ フ ィ リ ン) の structure decision: コ フ ィ リ ン は pH dependent な ア ク チ ン collection suppression factor, ADF は pH of interdependent な ア ク チ ン で overlap factor, と も に if young jin で 働 く. Cut を こ れ ら の tectonic と service さ ら に understand す る た め に, 鶏 skeletal muscle か ら have た mRNA に す seaborne る lambda gtllcDNA ラ イ ブ ラ リ - よ り each protein の full ア ミ ノ acid with column に quite す る cDNA を, そ れ ぞ れ に す seaborne を る specific antibody with い て ク ロ - ニ ン グ, そ の salt base full column を decided し た. Salt base with column か ら know ら れ る protein の a tectonic は コ フ ィ リ ン で は 166 ア ミ ノ acid residue, ADF で は 165 residues で あ る. Today back to determine さ れ た ニ ワ ト リ skeletal muscle コ フ ィ リ ン の ア ミ ノ acid with は, both に decided さ れ た ブ タ 脳 の コ フ ィ リ ン の occasions と 80% の ホ モ ロ ジ - を shown し た. ま た struck protein の ア ク チ ン overlap へ の unseen fruit に は 顕 the poor な が あ る に も detained ら ず, struck の ア ミ ノ acid with column に は い high (about 70%) の ホ モ ロ ジ - が confess め ら れ た. ま た, struck protein の a tectonic に は SV40T antigen で し ら れ て い る nuclear migration シ グ ナ ル, ト ロ ポ ミ オ シ ン と の common column, he の ア ク チ ン binding protein (ゲ ル ゾ リ ン, プ ロ フ ィ リ ン, フ ラ グ ミ ン) と な with same column が exist し た. The な violation of the <s:1> function of two proteins が が in one structure, the に of the <s:1> <s:1> site に stipulates that the される される is more に検 in である. 2. The reinforcement 発 raw で の 発 - now: ADF は reinforcement の mature に つ れ そ の 発 now low は す る が, コ フ ィ リ ン は mature reinforcement で も 発 は now hold 続 す る こ と が わ か っ た. 3. The で <s:1> protein <e:1> in the cell exists in パタ- <e:1> : 蛍 photoantibody method によ <s:1> 検 検 to obtain た た. Youdaoplaceholder0 <e:1> and ADFと る are usually <s:1> cultured to show that the main に cytoplasm of the tendon cells is に拡 scattered and <s:1> て る る る る. Steel tube cell を DMSO 処 Richard す る と, muscle cytoplasm に し た コ フ ィ リ ン は intranuclear に transitional し ア ク チ ン と と も に 顕 the な ロ ッ ド structure を form す る の が recognize め ら れ た. さ ら に, コ フ ィ リ ン は elongation stage の muscle cells の end に collection, ま た hot シ ョ ッ ク を by け た muscle cells で ア ク チ ン と と も に granular structure に collection な ど colorful な vibration dance を す る の に し seaborne, ADF は に cytoplasm often に company, scattered し て exist し た.

项目成果

Hiromi Takano-Ohmuro: "Size and charge heterogeneity of C-protein isoforms in avian skeletal muscle.Expression of six different isoforms in chicken muscle." Journal of Muscle Research and Cell Motility. 10. 369-378 (1989)

Hiromi Takano-Ohmuro：“禽类骨骼肌中 C 蛋白异构体的大小和电荷异质性。鸡肌肉中六种不同异构体的表达。”

Takashi Kojima: "Characterization of C-protein isoforms expressed in developing,denervated,and dystrophic chicken skeletal muscles by two-dimensional gel electrophoresis" Journal of Biochemistry. 107. 470-475 (1990)

Takashi Kojima：“通过二维凝胶电泳表征发育中、去神经和营养不良的鸡骨骼肌中表达的 C 蛋白亚型”《生物化学杂志》。

Sumiko Ohshima: "Isolation of profilin from embryonic chicken skeletal muscle and evaluation of its interation with different actin isoforms." Journal of Biochemistry. 105. 855-857 (1989)

Sumiko Ohshima：“从鸡胚骨骼肌中分离 profilin 并评估其与不同肌动蛋白亚型的相互作用。”

Hiroshi Abe: "An actin depolymerizing protein in embryonic chicken skeletal muscle:Purification and characterization." Journal of Biochemistry. 106. 172-180 (1989)

Hiroshi Abe：“胚胎鸡骨骼肌中的肌动蛋白解聚蛋白：纯化和表征。”

Hiroshi Abe: "A cofilin-like protein is involved in the regulation of actin assembly in developing skeletal muscle." Journal of Biochemistry. 106. 696-702 (1989)

Hiroshi Abe：“肌丝蛋白丝切蛋白样蛋白参与骨骼肌发育过程中肌动蛋白组装的调节。”