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アクチン結合蛋白質ユフィリン・αアクチニンなどによる平滑筋細胞の形態の調節

肌动蛋白结合蛋白euphyllin、α-actinin等对平滑肌细胞形态的调节

基本信息

批准号：
04263209
负责人：
大日方昂
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平滑筋内のアクチン結合蛋白質(コフィリンとプロフィリン)に関し、細胞内の作用、分子構造などを検討した。1)ほ乳類のコフィリンアイソフォームおよび平滑筋での発現:ほ乳類には筋型および非筋型コフィリンが存在、平滑筋(大動脈)では前者が主に発現することがわかった。そこで、筋型コフィリンのcDNAをPCR法によりクローン化、その配列を決定した。アミノ酸配列は、非筋型アイソフォームと80.3%の一致をみた。筋型、非筋型コフィリンの発現をノーザンブロット法で調べた結果、前者は骨格筋、心筋、精巣、C2筋管細胞などで、後者は脳、精巣、胃、C2筋芽細胞などで顕著に検出された。平滑筋株細胞(PAC1とA10)では、通常は非筋型のみを発現するが、IGFとトランスフェリンを含む無血清培地で、筋型コフィリンの出現がみられた。2)培養筋細胞内でのコフィリンのアクチン繊維への作用の検討:大腸菌内でコフィリンを合成、これを蛍光標識して若い筋細胞に多量に注入したとき、細胞内のアクチン繊維は速やかに崩壊してアクチンとコフィリンからなるロッドを形成した。しかし、24時間を経るとアクチン繊維は再生された。一方、コフィリンcDNAのトランスフェクションにより筋細胞内のコフィリンの発現量を高めたとき、そのままではアクチンへの強い作用は見られず、細胞の熱刺激やDMSO刺激によりコフィリンは活性化され、アクチン繊維の消失とアクチン/コフィリンロッドの形成が起こった。これらより、コフィリンは細胞内でその活性は制御を受けていると考えられた。また、細胞周期に依存してコフィリンのリン酸化が著しく変化、リン酸化がコフィリンの活性制御の一因であることを見いだした。3)平滑筋でのプロフィリンの発現:幼若筋で発現するプロフィリンcDNAのほぼ全長の配列を決定した。親平滑筋(砂嚢)でもこのmRNAの多量発現がわかった。

The relationship between the acondin-binding protein () in smooth tendons, its intracellular functions, and molecular structure are discussed. 1) The occurrence of soft tissue and smooth muscle: soft tissue and smooth muscle exist, smooth muscle (artery) is opposite to the former. PCR was used to determine the sequence of cDNA of the muscle type. 80.3% of the total number of acid pairs, non-muscle pairs, The results showed that the development of muscle cells, cardiac muscle cells, sperm cells and C2 muscle cells in muscle type and non-muscle type were different. Smooth muscle cells (PAC1 and A10) are usually non-muscle cells, IGF cells, and serum-free cells. 2)A study on the effect of protein synthesis in cultured muscle cells: protein synthesis in Escherichia coli, protein labeling in vitro and protein formation in cultured muscle cells. 24 hours later, the company was reorganized. The expression of cDNA in muscle cells was high, and the expression of cDNA in muscle cells was high. The strong action of cDNA in muscle cells was observed. The thermal stimulation of cells and DMSO stimulation caused the activation of cDNA, the disappearance of cDNA and the formation of cDNA. The activity of the cell is controlled by the enzyme. The cell cycle is dependent on the activity of the enzyme. 3)The development of smooth muscle tissue: the development of smooth muscle tissue determines the sequence of the full length of cDNA. The expression of mRNA in the smooth muscle of the parent was detected in a large amount.