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組織標本中の寄生虫体同定法への分子生物学的応用

分子生物学在组织标本中寄生虫鉴定中的应用

基本信息

批准号：
04807028
负责人：
村主節雄
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kagawa Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807028/
关键词：
寄生虫体組織標本同定 DNA プルーブ

项目摘要

本年度は先ず犬糸状虫の抽出DNAの制限酵素による切断片の多型性について検討した。他教室の実験後の犬より犬糸状虫成虫を摘出し、-20℃に保存した。DNAの抽出は虫体を細切後、Tris‐HCLバッファー中においてプロテナーゼK,及びSDS(Sodium Dodecyl Sulfate)にて消化し、フェノール及びクロロフォルムで除蛋白を行なった。これをさらにエタノールにてDNAを沈澱後、乾燥させTEバッファーに溶解し、分光光度計にてその精製度及びDNA量を測定した。これらの分離DNAを以下の18種類の制限酵素、すなわち Alu I,Ava I,Ava II,Bam H I,Bag I,Hinf I,Kpn I,Msp I,Rsa I,Sac I,Sfi I,Xba I,Xha Iにより切断し、ミューピッドの電気泳動装置により0.8%Agarose1600 TEA bufferゲルにて泳動をした。一般に線虫の有するDNAの塩基対数は億のオーダーであり、上記酵素により数万〜数十万の断片を生ずるので、これはEtBr(エチジュームブロマイド)の染色によって一般的にスメヤー状の泳動像を呈すると思わわれる。しかし、今回の我々の実験においては現在までのところ、少なくともAva I においては 3本、Ava II に1本、Hind III に 2本、MSP I に 1本、Xba I に 2本それぞれバンドが認められた。このことはこれらのバンドの位置及び数を他種フィラリア類のものとの相違について詳しく分析し、そのパターンをそれぞれの種において確定すれば、組織標本中の犬糸状虫の同定のみならず他種フィラリアを始め寄生虫類の同定の新たな手段の開発につながるものである。

This year, we have been investigating the polymorphism of DNA fragments from canines and restriction enzymes. The adult canines were harvested and stored at-20℃. DNA was extracted from the worm after microdissection, Tris-HCL in the middle of the medium, and SDS(Sodium Decyl Sulfate) in the digestion, white and white protein removal. After precipitation, drying, dissolution and spectrophotometric determination of DNA content The isolated DNA contained the following 18 restriction enzymes: Alu I,Ava I,Ava II,Bam H I,Bag I,Hinf I,Kpn I,Msp I,Rsa I,Sac I,Sfi I,Xba I,Xha I. In general, the number of DNA gene pairs in the genome of the worm is hundreds of millions. In addition, the enzyme is tens of thousands to hundreds of thousands of fragments. In addition, the staining of EtBr( Ava I, Ava II, Hind III, MSP I, Xba II, Xba I, Xba I, Xba The position and number of these species are analyzed in detail, and the species are identified. The development of new methods for the identification of canines and other species in tissues is also discussed.