ヒト大脳中に存在し、年齢依存性変化を示すカルモジュリン様タンパク質に関する研究

对存在于人类大脑中并显示出年龄依赖性变化的类钙调蛋白的研究

• 批准号: 04836007
• 负责人: 安田 年博
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04836007/
• 关键词: 老化; 脳; タンパク質; 免疫学的検出; カルモジュリン; リボヌクレアーゼ; アイソザイム; 電気泳動法

1.0-40歳までのヒト大脳中には検出できるが、それ以降の年齢層では含量が著しく減少するcalmodulin様活性を有す蛋白質(ARPB)を見出した。今回精製ARPBを家兎に注射し作製した免疫血清を用いてARPBの免疫学的性状を解析した。(1)ARPBの家兎に対する免疫原性は低く、生化学的性状とともに免疫原性に関してもARPBはcalmodulinに類似していた。(2)ARPBが認められる若年者由来の各種臓器によるARPB免疫血清の吸収実験から、APRBは免疫学的に脳特異的であることが知られた。(3)さまざまな年齢層由来の脳による吸収実験から、今回作製した免疫血清には40歳以上の壮年及び老年者の脳成分と交差反応を示す抗体も存在するが、明らかに若年者に特異的な脳成分に対する抗体を含有していた。(4)ARPB免疫血清はcalmodulinと交差反応を呈した。以上の結果から、ARPBとcalmodulinとの間の免疫学的類似性が認められることが明らかになった。このARPB免疫血清は抗体価が極めて低いため詳細な免疫学的検索には利用出来なかった。より抗体価の高い特異抗体の作製が今後の課題となった。2.ヒトリボ核酸分解酵素(RNase)活性は年齢依存性を示すだけではなく、Alzheimer病変に伴い変動を生じることが知られている。今回分子多様性を考慮した2種類のRNaseアイソザイム解析法を確立した。(1)等電点電気泳動の高分解能に見合うRNase活性染色法として、DAFO法を開発した。DAFO法は高感度(0.1ng以下のRNase Aを検出)であるうえ、免疫ブロット法に匹敵するような高分解能を有していた。DAFO法はアイソトープなどの特殊な試薬を必要とせず汎用性は極めて高かった。(2)ヒトRNaseの部分アミノ酸配列に相当する合成ペプチドに対する抗体は、RNaseアイソザイムの検出やRNaseの免疫学的同定に極めて有用であった。

1.0-40 years old, the content of calmodulin and protein (ARPB) in the middle of the body is reduced. ARPB is currently being refined for immunologic characterization by injection and use. (1)ARPB has low immunogenicity and biochemical traits related to immunogenicity. ARPB is similar to calmodulin. (2)ARPB has been recognized as the origin of various organs, ARPB immune serum absorption, APRB immunology specific, and APRB. (3)In addition, the immune serum of the aged and older people showed the presence of antibodies, which were specific to the aged. (4)ARPB immune serum calmodulin cross-section anti-virus. The above results are similar to those of ARPB and calmodulin. The ARPB immune serum is very low in detail and can be used in immunology. The production of high specific antibodies is a future topic. 2. The activity of RNase depends on the age of the patient. Now molecular diversity is considered and two kinds of RNase analysis methods are established. (1)The high decomposition energy of isoelectric point electrophoresis can be seen in RNase activity staining method and DAFO method. DAFO method has high sensitivity (RNase A detection below 0.1ng), and high decomposition energy is comparable to DAFO method. DAFO law is very useful for special applications. (2)Some of the RNase sequences are related to the synthesis of antibodies, RNase expression and identification of RNase in immunology.

项目成果

Daita Nadano: "Measurement of deoxyribonuclease I activity in human tissues and body fluids by a single radial enzyme-diffusion method" Clinical Chemistry. 39. (1993)

Daita Nadano：“通过单一径向酶扩散法测量人体组织和体液中的脱氧核糖核酸酶 I 活性”临床化学。

Kazumi Sawazaki: "Deoxyribonuclease I(DNase I)typing fron semen stains:low enzyme activity vaginal fluids does not interfere with seminal DNase I typing from mixture stains" Journal of Forensic Science. 38. (1993)

Kazumi Sawazaki：“精液染色中的脱氧核糖核酸酶 I(DNase I) 分型：酶活性低的阴道液不会干扰混合染色中的精液 DNase I 分型”《法医学杂志》。

Kazumi Sawazaki: "Transferrin(TF)typing from semen stains using isoelectric focusing and immunoblotting:correlation of TF types among blood,semen,urine,and vaginal secretion" Journal of Forensic Sciences. 37. 1514-1524 (1992)

Kazumi Sawazaki：“使用等电聚焦和免疫印迹从精液染色中进行转铁蛋白 (TF) 分型：血液、精液、尿液和阴道分泌物之间 TF 类型的相关性”《法医科学杂志》。

安田 年博: "エンドヌクレアーゼアイソザイムの高感度活性染色法ーDried agarose film overlay(DAFO)法のRNase,DNaseアイソザイムの生化学的分析への応用" 生化学. 65. 39-42 (1993)

Toshihiro Yasuda：“核酸内切酶同工酶的高灵敏活性染色方法 - 干琼脂糖膜覆盖 (DAFO) 方法在 RNase 和 DNase 同工酶生化分析中的应用”《生物化学》65. 39-42 (1993)。

Toshihiro Yasuda: "Survey on the association of deoxyribonuclease(DNase I) polymorphism with disease" Human Heredity. (1993)

Toshihiro Yasuda：“脱氧核糖核酸酶（DNase I）多态性与疾病关联的调查”人类遗传。