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年齢推定に関する分子生物学的アプローチ

年龄估计的分子生物学方法

基本信息

批准号：
08877080
负责人：
安田年博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877080/
关键词：
個人識別年齢推定老化アミノ酸配列分子生物学

项目摘要

成長の各ステージにおいて特異的に出現・消失する生体分子を指標とすれば年齢推定は用意であり、本研究ではこれら年齢依存性生体分子の検出・解析による個人の年齢推定を目的とした。我々はすでに数種類の年齢依存性生体分子を発見しており、本研究ではそのなかで17才以下の若年者尿中には存在するが、それ以上になると検出できなくなる酸性糖タンパク質(Ugl-Y)に着目した。同一個人より採取した尿より部分精製したUgl-Y標品を等電点電気泳動によって分離した後、Ugl-Yを膜フィルターに転写した。得られた転写物について、trypsinなどの数種類のタンパク質分解酵素処理を行いHPLCを利用して各種ペプチドを精製した。得られたペプチドのアミノ酸配列を気相ペプチドシークエンサーによって解析し、ugl-Yの一次構造(180アミノ酸残基)を決定した。その結果、その構造はfibronectinの一部にほぼ一致することが明らかとなった。次に、決定された一次構造に基づき作製したDNAフラグメントを利用したノーザンハイブリダイゼーションによって、fibronectinに対応するmRNA以外に1.5kb相当のmRNA分子種の存在が見出され、従ってUgl-Yはfibronectinのpost-translationalな産物ではなく、特有なmRNAより翻訳されているものと考えられた。今後の課題はUgl-Y特異的cDNAのクローニングであり、現在rapid amplification of cDNA end(RACE)法によるUgl-Y特異的cDNAの構築を計画している。

Growth and development, specific appearance and disappearance of biological molecules, and indicators of age and age estimation. The purpose of this study is to analyze age-dependent biological molecules and to estimate age of individuals. I have several types of age-dependent biological molecules, and this study focuses on those who are under 17 years old. The presence of acidic sugar, Ugl-Y, and other acidic sugars in the urine. The same person took part of the Ugl-Y urine and purified the Ugl-Y standard product and separated it by isoelectric point electrophoresis, and then wrote the Ugl-Y membrane filter. Get られた転物について, trypsin などの several kinds of のタンパクmass decomposing enzyme treatment を row いHPLC をutilization して various ペプチドを refined した. Get the られたペプチドのアミノ acid formula を気phase ペプチドシークエンサーによっThe primary structure of ugl-Y (180 アミノ acid residues) was determined based on the analysis.そのRESULTS, そのstructuralはfibronectinの一一にほぼ unanimous することが明らかとなった. The second time, the decision was made once the structure was constructed, and the DNA was used to make the DNA.イゼーションによって、fibronectin に対応するmRNA other than 1.5kb equivalentのm RNA molecule species existが见出され、従ってUgl-Yはfibronectinのpost-tr anslationalなproductではなく, uniqueなmRNAより译訳されているものと考えられた. Future projects include the construction of Ugl-Y-specific cDNA and the rapid amplification of cDNA end (RACE) method.