ルミノール化学発光の遅延現象を利用する還元性生理活性物質の高感度分析法

利用鲁米诺化学发光延迟现象还原生理活性物质的高灵敏度分析方法

• 批准号: 05650807
• 负责人: 上舘 民夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05650807/
• 关键词: 化学発光; ルミノール; アスコルビン酸

1.生理活性物質として重要な役割を果たしているグルタチオン(GSH)は銅(II)触媒を用いる接触酸化により,H_2O_2と二硫化物を生成する。いま,生成するH_2O_2をペルオキシダーゼ(POD)を触媒とするルミノール化学発光(CL)で反応開始から逐次測定したとき,CLが遅延して発現する現象を見出した。そこで本研究では,本遅延CL反応をGSHの計測法に応用した。なお,PODには西洋わさび由来のHRPおよび微生物由来のARPを使用した。HRPおよびARPを用いて,銅(II)触媒によるGSHの接触酸化で生成するH_2O_2を測定した結果,いずれのPODにおいても,反応開始直後に第一ピークが,さらに,反応開始後しばらくしてから第2ピークが発現した。第2ピークが発現する時間はARPのほうが短かった。また,いずれのPODにおいても,第2ピーク強度がGSH濃度に依存したことから,第2ピーク強度が最大になるように,pH,POD,ルミノールおよび銅(II)濃度を最適化し,検量線を作成した。ARPを用いた場合,GSH濃度が7.5x10^<-7>M〜3.0x10^<-5>Mの範囲で,また,HRPを用いた場合,1.0x10^<-5>M〜1.0x10^<-3>Mの範囲でCL強度と良好な直線関係が得られた。以上の結果から,ARPを用いた場合,従来法と比較してより高感度なGSHの定量が可能である。2.HRPとARPを用いた場合とで,第2ピークが発現する時間が変化した原因を明らかにするため,それぞれのPODサイクルで生成するPOD中間体の生成速度をストップドフロー法で求めた。その結果,POD中間体の生成速度はHRP系に比較してARP系において著しく増大することがわかった。したがって,ARPの場合,ルミノールラジカルの生成速度も速いことが予想され,そのためHRPに比較して第2ピークの応答が早まったものと考えられる。

1. The important physiologically active substance としてな抯 Cut the fruit たしているグルタチオン (GSH) and the copper(II) catalyst are acidified by いる contact, H_2O_2 and disulfide are generated.いま, generate するH_2O_2をペルオキシダーゼ(POD)をcatalyst とするルミノールchemistry The reaction of CL (CL) is started and measured one by one, and the phenomenon of CL is delayed and the phenomenon is seen. The purpose of this study is to use the CL reaction measurement method of GSH.なお, POD に は 西洋 わ さ び 来 のHRP お よ び MICROLOGY RISE の ARP を USE し た. HRPおよびARPをいて, copper(II) catalystによるGSHのcontact acidificationでgenerationするH_2O_2をmeasurementした results,いずれのPOD においても, the reaction begins and the first ピークが, さらに, the reaction starts and the 2nd ピークが発appears. The second time is the short time of ARP.また, いずれのPOD においても, 2nd ピーク strength がGSH concentration にdependence したことから, 2nd ピーク strengthがMaximum になるように, pH, POD, ルミノールおよび copper (II) concentration を optimization し, measurement line を made した. When ARP is used, the GSH concentration is 7.5x10^<-7>M~3.0x10^<-5>M, and the range is HRP. When used, the range of 1.0x10^<-5>M~1.0x10^<-3>M means that the CL strength and good linear relationship are obtained. The above results show that when ARP is used, it is possible to use the comparison method to quantify high-sensitivity GSH. 2.HRP and ARP are used in situations and situations, and the second reason is that the time has changed and the reason has been changed.め,それぞれのPODサイクルでGenerationするPOD intermediateのgeneration speedをストップドフロー法でquestめた. As a result, the production rate of POD intermediates is higher than that of the HRP system and the ARP system is relatively large.したがって, ARP's case, ルミノールラジカルのgeneration speed もspeed いことが yu want され, そのためHRPに compare して 2nd ピークの応 Answer がEarly まったものとtest えられる.

项目成果

上舘 民夫: "Simultaneous Determination of Cysteine and Glutathione via Use of Time-Resolved Luminol Chemiluminescence Method" Chemistry Letters. 2049-2052 (1993)

Tamio Uedate：“使用时间分辨鲁米诺化学发光法同时测定半胱氨酸和谷胱甘肽”化学快报2049-2052（1993）。

上舘 民夫: "Effects of Metal Ions on Delayed Chemiluminescence Reaction of Luminol Catalyzed by Copper(II)" Bulletin of The Chemical Society of Japan. 66. 655-657 (1993)

Tamio Uedate：“金属离子对铜 (II) 催化的鲁米诺延迟化学发光反应的影响”日本化学会通报 66. 655-657 (1993)。

上舘 民夫: "Peroxyoxalate Chemiluminescent Assay of Ascorbic Acid Based on Oxygen in Reversed Micelle" Chemistry Letters. 113-116 (1994)

Tamio Uedate：“基于反胶束中的氧的抗坏血酸的过氧草酸盐化学发光测定”化学快报 113-116 (1994)。