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ルジョウイルスにおける宿主域の推定と治療標的の探索ー受容体CD63に注目してー

估计卢霍病毒的宿主范围并寻找治疗靶点 - 关注受体 CD63

基本信息

批准号：
21K20609
负责人：
齋藤健
金额：
$ 2万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ルジョウイルス（LUJV）はアレナウイルス科に属し、ヒトに致死的な出血熱を引き起こす。LUJVは2008年にアフリカ南部にて一時的なアウトブレイクを引き起こしたが、以降感染者の報告はなく、疫学調査でも検出されておらず、その生態は謎に包まれている。またその希少性故にワクチンや抗ウイルス薬は開発されていない。本研究ではLUJV受容体であるCD63に着目し、LUJVの宿主域の解明や抗ウイルス薬の開発を目指した。これまでの研究からヒトCD63のC末端側のループ構造（LEL）のうち141～150番目のアミノ酸配列がLUJV感染に重要であることがわかっている。変異体ヒトCD63を用いた解析から143番目のフェニルアラニン（F143）がLUJV感染に重要であることが明らかになった。F143は一部のげっ歯類を除いた哺乳類で広く保存されており、LUJVは広い宿主域を有することが示唆された。CD63はLUJVの表面糖タンパク質（GPC）との相互作用することが示唆されたため、Biacoreを用いた分子間相互作用解析を行った。しかしながらLUJV GPCとCD63の相互作用は非常に弱く、その他の分子が相互作用に影響することが考えられる。ヒトCD63の141～150番目のアミノ酸配列を基に合成した部分的CD63ペプチドによるPVSV-LUJVに対する感染阻害効果を検証したが、感染抑制は認められなかった。LUJVに対する中和抗体の作出を目指し、分泌型組換えLUJV GPCをマウスに免疫し、ハイブリドーマを樹立し高い活性を示す中和抗体を得た。さらに、EGFP-HiBit発現HEK293細胞とmCherry-LgBit発現HEK293細胞を作製し、低pH下でのLUJV GPCによる細胞間膜融合の新たな評価系を樹立した。

The disease is caused by a lethal hemorrhagic fever. LUJV in 2008, the southern part of the country, the United States and other countries in the past three years, the United States and other countries in the past five years, the United States and other countries in the world. It is desirable to have a small number of products, so it is necessary to have a small number of products. This study is aimed at understanding the host domain of LUJV and the development of LUJV receptor CD63. The study of CD63 and its C-terminal structure (LEL) is important for LUJV infection. CD63 is the most important part of LUJV infection. F143 is a part of the mammalian family. It is preserved in the LUJV host domain. CD63 has been used to analyze molecular interactions between LUJV and GPC. The interaction between LUJV and GPC 63 is very weak, and the interaction between other molecules is very weak. CD63 and CD63 141~150 were identified as the basis for the synthesis of PVSV-LUJV infection inhibitors. LUJV Neutralizing Antibody Production Instructions, Secretory Type, and High Activity In addition, EGFP-HiBit developed HEK293 cells and mCherry-LgBit developed HEK293 cells and established a new evaluation system for cell-to-cell membrane fusion at low pH