アクチビンA/EDFの生理活性の解析-巨核球分化誘導時の細胞周期調節因子の動態

激活素A/EDF的生理活性分析——巨核细胞分化诱导过程中细胞周期调节因子的动态

• 批准号: 05670918
• 负责人: 河北 誠
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670918/
• 关键词: 巨核球系細胞株; 同調培養; PMA; 巨核球分化; 細胞周期調節因子; GPIIb; IIIa; GATA-1

L8057の同調培養系の確立を試み、ハイドロキシウレア(HU)、ノコダゾール、トリコスタチンAを用いたが、これら試薬への細胞の抵抗性が弱く、処理により十分な数の同調生細胞を得られず、現在新たな方法を模索中である。そこで今年度は既に当教室で同調培養法を確立した巨核芽球性白血病細胞株CMKを用い、PMA刺激時の巨核球系の分化マーカーGPIIb/IIIaの発現を指標として、巨核球分化誘導時の細胞周期調節因子の動態を解析した。その結果、HUにより細胞周期を同調したCMKをG1/S期(同調培養開始:0時間)にPMA刺激するとG2期に、G1早期(同調開始後13時間)に刺激するとG1期後半に細胞周期は一時的に停止した。Northern blottingを行うと、細胞周期の停止に一致して、細胞周期調節遺伝子であるcyclin A,B,D1のmRNAのdown regulationが見られた。最も興味深い所見は、G2期およびG1期後半いずれの時期の周期停止においても、同時に細胞表面上のGPIIb/IIIaの劇的な発現誘導が認められたことである。さらにGPIIB/IIIa発現は、Zn finger型転写因子であるGATA-1のmRNA発現と同調することも明らかになった。GATA-1は赤血球系に特異的な遺伝子のpromoterあるいはenhancerに結合することが知られているが、同時に巨核球系にも発現し、GPIIb遺伝子のpromoter領域に結合することが報告されている。アクチビン処理によるK562の分化誘導には、G1期における再病周期の一時的停止が伴うと報告されている。このことから増殖の遅延もしくは停止は細胞の分化と密接に関連していることが伺われる。今回、CMKにおいてはG1期停止のみならずG2期においても細胞周期が停止し、同時に細胞分化が進展することが明らかになった。従つて巨核球系においても、増殖の停止が分化と密接に関連していることが推定される。特にG1,G2両期における分化誘導は、巨核球の多核化の現象を解明するうえで重要な所見と考えられ、現在IL-3などの生理的因子によるCMK刺激での解析、他の巨核球系細胞株での検討を行っている。今年度得た上記の知見については、現在投稿中である。

L8057 の homology education is の establish を み, ハ イ ド ロ キ シ ウ レ ア (HU), ノ コ ダ ゾ ー ル, ト リ コ ス タ チ ン A を use い た が, こ れ ら try 薬 へ の cells の resistance が weak く, 処 に よ り very な number の homology living cells を go ら れ ず, now the new た な method を die line で あ る. そ こ で our は に both when the classroom で homology culture method を establish し た giant nuclear gemmule leukemia cell lines CMK を い, PMA stimulation の giant nuclear ball is の differentiation マ ー カ ー GPIIb/IIIa の 発 now を index と し て, megakaryocytes differentiation induced の cell cycle regulatory factor の dynamic を し た. そ の results, HU に よ り cell cycle を homology し た CMK を G1 / S phase, homology training begins: 0 time に PMA stimulation す る と G2 に, G1, homology began 13 time early に stimulus す る と G1 phase after half に cell cycle は transient に stop し た. The を lines of Northern blotting うと, the <s:1> cessation of the cell cycle に is consistent with the <s:1> て, and the 伝 and である of cyclin A,B, and D1 mRNA <s:1> down regulationが of the cell cycle regulator are seen in られた. Seen the も tumblers deep い は, G2 お よ び G1 phase after half い ず れ の の period cycle stop に お い て も, at the same time に cell surface の GPIIb/IIIa の drama な 発 induced が now recognize め ら れ た こ と で あ る. さ ら に GPIIB/IIIa 発 は, zinc finger type planning write factor で あ る の GATA - 1 mRNA 発 now と homology す る こ と も Ming ら か に な っ た. GATA - 1 は な of red blood cell is に specific 伝 son の promoter あ る い は enhancer に combining す る こ と が know ら れ て い る が, and giant nuclear に ball に も 発 し now, traces of GPIIb 伝 son の に promoter field combining す る こ と が report さ れ て い る. ア ク チ ビ ン 処 Richard に よ る K562 の induction に は, G1 phase に お け る の a temporary stop が disease cycle again with う と report さ れ て い る. こ の こ と か ら raised colonization の 遅 delay も し く は stop は cells の と contact に masato even し て い る こ と が bar わ れ る. Today, back CMK に お い て は G1 phase stop の み な ら ず G2 に お い て も が stop し cell cycle, at the same time に cell differentiation が progress す る こ と が Ming ら か に な っ た. 従 つ て giant nuclear ball is に お い て も の stop が differentiation, raised colonization と contact に masato even し て い る こ と が presumption さ れ る. に G1 and G2 stage struck に お け る induction は, giant nuclear ball の nucleation の phenomenon more を interpret す る う え で と な see important exam え ら れ, IL - 3 now な ど の physiological factor に よ る CMK stimulus で の parsing, he の giant bulge cell lines で の 検 line for を っ て い る. This year 's achievements: た, please record your views: に, た, て,. Submissions are now in progress: である.

项目成果

Masuda T,Kawakita M,etal: "Establishment of a human T cell line with deficient surface expression of glycosylphosphatidylinositol(GPI)-anchored protein from a patient with paroxysmal nocturnal haemoglobinuria." Br.J.Haematol.in press.

Masuda T、Kawakita M 等人：“从患有阵发性睡眠性血红蛋白尿症的患者中建立了糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 锚定蛋白表面表达缺陷的人类 T 细胞系。”

Yonemura Y,Kawakaita M,et al: "Effect of recombinant human interleukin-11 on rat megakaryopoiesis and thrombopoiesis in vivo:comparative study with interleukin-6." Br.J.Haematol.84. 16-23 (1993)

Yonemura Y、Kawakaita M 等人：“重组人白细胞介素 11 对大鼠体内巨核细胞生成和血小板生成的影响：与白细胞介素 6 的比较研究”。

Hatanaka M,Kawakita M,et al: "Implication of membrane factors other than DAF and CD59 in complement-mediated lysis of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria erythrocytes." J.Immunol.Immunopathol.69. 52-59 (1993)

Hatanaka M、Kawakita M 等人：“DAF 和 CD59 以外的膜因子在补体介导的阵发性睡眠性血红蛋白尿红细胞裂解中的影响。”

米村雄士、河北 誠 他: "巨核球造血とサイトカイン" Pharma Medica. 11. 61-70 (1993)

Yuji Yonemura、Makoto Kawakita 等：“巨核细胞生成和细胞因子”Pharma Medica 11. 61-70 (1993)。