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In vivo遺伝子導入による糸球体腎炎モデルの作製

通过体内基因转移建立肾小球肾炎模型

基本信息

批准号：
05670953
负责人：
藤原芳廣
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

単一の成長因子の糸球体内過剰発現により免疫学的機構を介さない糸球体腎炎のモデルを作製するため以下の実験を行った。まず糸球体腎炎の発症、進展においてその関連が注目されているPDGF,TGF-βのcDNAを含む発現ベクターを作製した。このプラスミドを核蛋白HMG-1とともにリポソームに封入し、その表面にHVJ(センダイウイルス)を配したHVJリポソームを作製し、ラット左腎動脈より注入してin vivo遺伝子導入を行った。そして遺伝子導入後3、5、7および28日後に腎を摘出し、固定後組織学的検討を行った。その結果、まず蛍光抗体法にて導入したPDGF,TGF-β蛋白の発現が糸球体に確認された。TGF-βのcDNAを導入したラットでは3日目から7日目まで糸球体の細胞外基質の有意の増加と軽度の細胞増殖を認めた。またPDGFのcDNAを導入したラットでは3日目より糸球体細胞の著明な増加を認め7日目で細胞数の増加は最高に達した。糸球体は一部分葉化し軽度の細胞外基質の増加を認めた。硬化の程度をあらわすmatrix indexは遺伝子導入後5日目でコントロールの0に対してTGF-β群で46.4、PDGF群で20.8であった。増加した細胞外基質は特異的な抗コラーゲン抗体を用いた免疫組織化学法によりIV型コラーゲンの他I型およびIII型コラーゲンを含むことが確認された。これらの間質型コラーゲンは通常の糸球体にはなく、ヒトの硬化糸球体において増加することが知られていることから、PDGF,TGF-β遺伝子導入により惹起された組織変化はヒトの糸球体硬化に質的にもきわめて類似し、実験モデルとしても役立つことが示された。そこでこの遺伝子導入モデルを用いて、糸球体硬化の増悪因子として臨床的にも注目されているレニン-アンギオテンシン系について糸球体への効果を検討した。ラットの腎にヒトレニンおよびアンギオテンシノーゲンの遺伝子を導入した。遺伝子導入した糸球体でメサンギウム基質の増加を認め、またメサンギウム細胞の形質転換の指標の一つとされているα smooth muscle cell actinの発現を確認した(現在論文準備中)。以上のようにin vivo遺伝子導入法を用いた新しい実験モデルを開発し、それを用いてサイトカイン、血管作働性物質の糸球体への直接効果を検討することに成功した。

The mechanism of single growth factor in the body of glomerulonephritis and immunology is the same as that of glomerulonephritis. The disease and progression of glomerulonephritis are related to PDGF, TGF-β, cDNA, and production. HMG-1 nuclear protein HMG-1 HMG-1 HMG-1ンダイウイルス)を配したHVJリポソームをproductionし,ラットLeft renal artery injectionしてin Vivo's legacy is imported into を行った. The kidney was removed 3, 5, 7 and 28 days after the kidney was inserted, and the histology after fixation was analyzed. The results were confirmed by the photoantibody method and the introduction of PDGF and TGF-β protein into spheres. The introduction of TGF-β cDNA into the 3rd day and the 7th day of the extracellular matrix of the spheroids and the intentional increase of the extracellular matrix and the recognition of the cell proliferation were carried out. The PDGF cDNA was introduced into the 3rd day of the spheroid cells and the number of cells in the 7th day was increased to the highest level. The spheroid is partially leafed and the extracellular matrix is increased and recognized. The degree of hardening is 46.4 for the TGF-β group and 20.8 for the PDGF group 5 days after the introduction of the matrix index. Adding the specific anti-ココラーゲン antibody to the extracellular matrix and using the immunohistochemistry methodによりType IV コラーゲンのhim Type I およびType III コラーゲンを窀ことが confirmed された.これらのInterstitial type コラーゲンはUsual の糸sphere にはなく、ヒトのhardened 糸Sphere において increase することが知られていることから、PDGF,TG The introduction of F-β residues into the body causes tissue changes and hardening of the spheres. The にもきわめて is similar to し, 実験モデルとしても伤ことが时时された.そこでこの伝子 introduces モデルを用いて, 糸sphere hardening のincreasing factor として clinical にもPay attention to the されているレニン-アンギオテンシン system について糸spherical へのeffect を検した.ラットの神にヒトレニンおよびアンギオテンシノーゲンの伝子を Import した. The remaining material is introduced into the sphere and the matrix is added.たメサンギウムcell morphological change index の一つとされているα The smooth muscle cell actin is now confirmed (the paper is currently being prepared).のようにin above How to introduce vivo legacy The direct effect of the トカイン, blood vessel as the substance of the の獸sphere is the success of the した.