矯正的歯の移動における骨基質蛋白遺伝子のin situハイブリダイゼーション

正畸牙移动过程中骨基质蛋白基因的原位杂交

• 批准号: 05671705
• 负责人: 山本 照子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671705/
• 关键词: osteopontin; osteonectin; osteocalcin; 生理的歯の移動; リモデリング; 歯根膜; 矯正的歯の移動; in situハイブリダイゼーション

不正咬合の治療に歯の移動を必要とする歯科矯正の分野では,歯の移動にともなう歯槽骨の改造機転,歯根吸収の機序の解明は重要である.一方近年,in situハイブリダイゼイション法が単一の細胞レベルで遺伝子発現を検討するための強力な手段となってきた.これは種々の異なる細胞が混在する組織の中で目的とする遺伝子がどの種類のどの時期の細胞で発現されているか局在できる.そこで,本研究では,矯正的歯の移動時の歯槽骨における骨基質蛋白遺伝子のin situハイブリダイゼイションを行った.矯正的歯の移動時の歯周組織の骨基質蛋白遺伝子のin situハイブリダイゼーション-7週齢Wistar系ラットの上顎第一臼歯と第二臼歯の歯間部に矯正用ゴムを挿入し,実験的歯の移動をおこなった.反対側は対照とした.歯の移動0,1,3,5,7日目にラットを屠殺し上顎骨を切り出し,4%パラホルムアルデヒド-PBSで固定し,10%EDTA-PBSで脱灰後,脱水し,パラフィンに包埋した.試料を5μmに薄切し,パラフィン除去後,前処置を施し,脱水後ハイブリダイゼイションを行った.プローブは,骨基質蛋白遺伝子としてbone Gla protein,(Osteocalcin),osteonectin,matrix Gla protein,osteopontin(2ar)のcDNAを用いてこれらのDIG RNAプローブを作成した.ハイブリダイゼイション後,抗体反応,発色反応をモイスチャーチャンバーの中で行った.その後,封入し,組織顕微鏡により歯の移動に伴う圧迫側と牽引側の皮質骨,歯槽中隔の海綿骨,象牙質およびセメント質の歯根吸収像を観察し,osteocalcin,osteonectin,osteopontin等の骨基質蛋白遺伝子発現の細胞局在を明らかにした.特にosteonectin遺伝子の発現については歯根膜の非特異的なシグナル発現を生じないハイブリダイゼイション条件を見いだすことに努力した.このように歯の移動における,これら遺伝子発現の経時的変動を検討し,歯の移動,歯根吸収のメカニズムを分子レベルで解明するとともに,骨組織における骨基質蛋白質の役割を明確にできた.これらの知見をJ Histochem Cytochemに投稿し印刷中である.さらにJ Dent Res,J Bone Min Resに投稿準備中である.

The treatment of malocclusion requires tooth movement, and it is important to clarify the mechanism of tooth root suction. In recent years,in situ, the method of cell culture and gene expression has been studied by powerful means. The cells of different species are mixed in the tissues, the purpose of the cells is different, the species is different, the cells are different, and the development of the cells is different. In this study, we found that the bone matrix protein gene in the dental socket during the correction of dental movement can be used as a marker for the development of bone matrix protein. The bone matrix protein gene of the peridental tissue in situ during orthodontic tooth movement was detected in the first and second maxillary interdental teeth of Wistar system at week 7. The opposite side is opposite. The teeth were moved 0, 1, 3, 5, 7 days after the cut, 4%, 5%, 7%, 8%, 9%,10 The sample was cut at 5μm, and after removal of the pigment, the pretreatment was carried out. After dehydration, the pigment was removed and the pigment was removed. The cDNA of bone Gla protein,(Osteocalcin),osteonectin,matrix Gla protein,osteopontin(2ar) was used to construct DIG RNA. After the initial reaction, the antibody was detected, and the color was detected. After implantation, tissue microscopy was used to examine the migration of the teeth with cortical bone on the compression and traction sides, spongy bone on the interalveolar septum, dentin, and dental roots. The cellular structure of bone matrix protein expression, such as osteocalcin,osteonectin, and osteopontin, was revealed. In the development of osteonectin gene, the non-specific expression of dentin root membrane was studied. The movement of the tooth, the movement of the bone matrix protein during the development of the tooth, the movement of the tooth, the absorption of the bone matrix protein during the molecular process, the movement of the bone matrix protein during the development of the bone matrix protein. This article is published in the journal Histochem Cytochem. J Dent Res,J Bone Min Res

项目成果

S.Nomura et al.: "Method for detecting the expression of bone matrix protein by in situ hybridization using decalcified mineralized tissue" Acta Cytochem HIstochem. 26. 303-309 (1993)

S.Nomura 等：“使用脱钙矿化组织通过原位杂交检测骨基质蛋白表达的方法”Acta Cytochem HIstochem。

相馬俊一 他: "静水圧および1a,25-dihydroxycholecalciferolが骨芽細胞様細胞株MC3T3E1細胞のアルカリフォスファターゼ活性に及ぼす影響" 阪大歯誌. 38. 509-513 (1993)

Shunichi Soma 等人：“静水压和 1a,25-二羟基胆钙化醇对成骨细胞样细胞系 MC3T3E1 细胞碱性磷酸酶活性的影响”大阪大学牙科杂志 38. 509-513 (1993)。

T.Takano-Yamamoto et al.: "Site specific expression of mRNA for osteonectin,osteocalcin and osteopontin by in situ hybridization in the rat periodontal ligament" J.Histochem Cytochem. (in press). (1994)

T.Takano-Yamamoto 等人：“通过原位杂交在大鼠牙周韧带中进行骨连接蛋白、骨钙蛋白和骨桥蛋白 mRNA 的位点特异性表达”J.Histochem Cytochem。

分担執筆 山本照子: "骨形成と骨吸収およびそれらの調節因子" 広川書店(印刷中),

合著者 Teruko Yamamoto：“骨形成、骨吸收及其调节因素”广川书店（出版中），

T.Takano-Yamamoto et al.: "Conditioned medium factors of rabbit cranio-facial chondrocytes stimulated their own syntheses of sulfated glycosaminoglycans and DNA" J.Osaka Univ Dent Sch. 33. 1-8 (1993)

T.Takano-Yamamoto 等人：“兔颅面软骨细胞的条件培养基因子刺激其自身硫酸化糖胺聚糖和 DNA 的合成”J.Osaka Univ Dent Sch。