TGF-βスーパーファミリーの象牙質発生過程における発現

牙本质发育过程中TGF-β超家族的表达

• 批准号: 06454543
• 负责人: 中島 美砂子
• 金额: $ 4.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06454543/
• 关键词: Bone morphogenetic protein; Growth and differentiation factor; Transforming growth factor-β; Dentinogenesis; Dental Pulp; In situ hybridization; Molecular cloning

TGF-βスーパーファミリーに属する未知の遺伝子をクローニングするべく、BMP-2&4,GDF-1の活性部位(ホモログ部)のDNA塩基配列により、DNAシンセサイザーを用いて3'末端プライマーおよび5'末端プライマー各々2種を作製した。3〜4週令ラット上下顎切歯から初期石灰化期に到るまでの根尖部歯髄を摘出し、AGPC法にて total RNA を分離した。ポリA^+RNAをオリゴdTセルロースにて精製し、Stratageneの Uni-Zap XR キットを用いてλZAPIIベクターに組み込んだcDNAライブラリーを作製した。このライブラリーをテンプレートとして前記各々2種のプライマーを用いて94℃15秒、44℃30秒、72℃1分30サイクルのPCRを行い、さらにそのPCR産物を用いて94℃15秒、54℃30秒、72℃1分30サイクルのPCRを行った。アガロースゲルからMagic PCR PrepにてcDNAを精製し、InvitorogenのTAクローニングシステムを用いて遺伝子をクローニングした。シーケンサーにて遺伝子塩基配列を決定した。得られた塩基配列をDNASIS-Macを用いて検索したところ、2つは既知のBMP-2およびBMP-4の塩基配列と完全に一致した。もうひとつはGDF1およびGDF7と54%のホモロジーが認められたが、TGF-βスーパーファミリーに特異的な活性部位の7つのシステインのうち4つがグルタミン酸に置換されており、ファミリーの一種とは考えにくいと思われた。現在、ホモログ部を除く部分のBMP-4のcDNAよりRNAプローブを作製し、ラット臼歯部生活歯髄切断後の歯髄創傷治癒過程におけるBMP-4のmRNAの発現をin situ hybridization 法により検討中である。

Two kinds of unknown genes were identified in TGF-β gene expression system, BMP-2 and BMP-4, DNA gene base alignment in the active site of GDF-1, 3'terminal region and 5' terminal region, respectively. 3 ~ 4 weeks old, the total RNA was isolated from the upper and lower mandibular incisors at the initial lime stage and from the root tips by AGPC method. A^+RNA can be used to refine the DNA sequence, and Stratagene's Uni-Zap XR can be used to refine the DNA sequence. The PCR products of two kinds of PCR products were used at 94℃ for 15 seconds, 44℃ for 30 seconds, 72℃ for 1 minute and 30 minutes respectively. Magic PCR Prep cDNA Refinement, Invitogen TA Library, Invitogen TA Library, Invitogen TA Library The distribution of the sub-groups is determined. DNASIS-Mac is used to detect and detect the base alignment of BMP-2 and BMP-4. GDF1 and GDF7: 54% of the total number of active parts of GDF1 and GDF7: 7 and GDF7: 5 respectively. Now, BMP-4 mRNA expression in site hybridization method is discussed in this paper.

项目成果

Y.Matsuki,M.Nakashima 他5名: "A compilation of partial sequences of randomly selected cDNA clones from rat incisor" J.Dent.Res.(in press). (1995)

Y.Matsuki、M.Nakashima 和其他 5 人：“大鼠门牙随机选择的 cDNA 克隆的部分序列汇编”J.Dent.Res.（出版中）。