象牙芽細胞分化決定遺伝子の分子生物学的分離

决定成牙本质细胞分化的基因的分子生物学分离

• 批准号: 05857217
• 负责人: 中島 美砂子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857217/
• 关键词: 象牙芽細胞; 象牙質形成; ライブラリー; in situ hybridization; 歯髄細胞; 細胞培養; mRNA; シーケンス

ウシ永久歯歯髄培養細胞の培養1週目(歯髄細胞)および培養4週目(前象牙芽細胞)よりAGPC法を用いてRNAを分離し、オリゴ(dT)セルロースを用いてpoly(A^+)RNAを抽出した。後者のcDNAをオリゴ(dT)をプライマーとして作製し、前者のpoly(A^+)RNAとハイブリさせ、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィによりハイブリしなかったcDNAを回収した。このcDNAより、lambdaZAPIIベクターおよびUni-Zap XRキット(Stratagene)を用いてサブトラクションライブラリーを作製した。ファージcDNAライブラリーはEx Assist 1 SOLR system(Stratagene)を用いてp Bluescript phagemid cDNAライブラリーに交換した。自動DNAシーケンサを用いて無作為に選択した50個のクローンの部分DNAシーケンスを決定した。シーケンスホモロジーは Gen BankデータベースおよびPIRプロテインデータベースで検索した。そのうち、15個はデータベースのものと一致し、5個は転写因子や細胞表面受容体のような遺伝子と類似していた。25個は未知の遺伝子であった。このうち5個をPGEM-Tベクター(Promega)にサブクローニングし、SP-6およびT7ポリメラーゼを用いてRNAプローブを作製した。ウシ永久歯歯胚パラフィン切片を用いて、in situ hybridizationを行い、mRNA発現部位を検索した。しかしながら、目的とする象牙芽細胞に特異的に発現されているクローンは見つけられなかった。現在、他の20個の未知の遺伝子に関してin situ hybridizationにて検索中である。

The cells were cultured for 1 week (tooth cells) and 4 weeks (pre-tooth bud cells). The AGPC method was used to isolate RNA and extract poly(A^+)RNA. The cDNA of the latter is divided into two parts: the first part is composed of poly (A ^+)RNA, the second part is composed of poly(A^+)RNA, and the third part is composed of poly(A^+)RNA. This cDNA, lambdaZAPII and Uni-Zap XR (Stratagene) are used to control the development of new technologies. Ex-Assist 1 SOLR system(Stratagene) is used in Bluescript phagemid cDNA translation. Automatic DNA analysis is used to determine the number of DNA samples selected.シーケンスホモロジーは Gen BankデータベースおよびPIRプロテインデータベースで検索した。The cell surface receptors are similar to the 15-cell receptor receptors. 25 unknown children. The five PGEM-T groups (Promega) are used to control RNA. The expression of mRNA was detected in situ hybridization and in situ hybridization. The ivory bud cells are unique in their development. Now, he has 20 unknown genes related to situ hybridization.