歯髄誘導因子を用いた羊膜幹細胞からの歯髄幹細胞の誘導法の開発

开发利用牙髓诱导因子从羊膜干细胞衍生牙髓干细胞的方法

• 批准号: 06F06588
• 负责人: 中島 美砂子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: National Institute for Longevity Sciences,NCGG
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06588/
• 关键词: 歯髄幹細胞; 羊膜幹細胞; 歯髄誘導因子; Runx3; Osterix; マイクロアレイ; electrophoretic mobility-shift assay; transdifferentiation; クロマチン免疫沈降法

私どもは、羊膜幹細胞を歯髄細胞系譜に転換させるための歯髄誘導因子として、歯発生において象牙芽細胞分化時に発現がみられるRunx3に着目した。う蝕などの歯髄への刺激により形成される修復象牙質は骨に非常に類似しており、Osterixは骨芽細胞分化および骨形成誘導することが知られている。よって、まず、Runx3によるOsterixの調節を検討した。遺伝子導入実験ではRunx3は歯髄細胞においてOsterix転写を抑制し、Runx3を強制発現させるとOsterix promoter活性を抑制した。歯髄細胞を用いたゲルシフトアッセイおよびクロマチン免疫沈降によりOsterix promoterへのRunx3の直接的な結合が明らかとなった。よって、歯髄細胞が象牙芽細胞に分化する際、Runx3はOsterix発現を調節する重要な役割を有し、その機能を用いて他の組織幹細胞を象牙芽細胞系譜に転換させることができる可能性が示唆された。次に私どもは、マウス羊膜幹細胞を歯髄細胞系譜に転換させる実験を試みた。まず、歯髄細胞に高発現するTRH-DE (thyrotropin-releasing hormone degrading ectoenzyme)を見出し、胎生14日目から分離した羊膜幹細胞にも羊膜組織そのものにもTRH-DEの発現はみられなかったことから、TRH-DEは羊膜幹細胞の転換のマーカーのひとつとして用いることができると判明した。Runx3を羊膜幹細胞に遺伝子導入するとTRH-DEが発現し、BMP2を添加した場合、培養21日目には象牙芽細胞分化マーカーEnamelysinが発現し、羊膜細胞の歯髄細胞系譜への転換が明らかとなった。さらに、脱灰象牙質基質上での三次元培養系、ならびにHAP/TCPに混合した生体内移植による細管象牙質形成の確認を行った。

Human amniotic stem cell lineage development and differentiation The stimulation of tooth decay and bone formation is very similar to that of osteoblast differentiation and bone formation. Osterix regulation is discussed in the following ways: Osterix promoter activity was inhibited by Runx3 stress expression. The cells are used in the direct binding of Osterix promoter and Runx3. The possibility of regulating the development of Osterix in human stem cells and ivory bud cells during differentiation of human stem cells and ivory bud cells is demonstrated by the existence of important functions and the use of other tissue stem cells and ivory bud cell lineages. This is the first time I've ever seen an amniotic stem cell. TRH-DE (thyrotropin-releasing hormone degrading enzyme) has been found in amniotic stem cells and amniotic tissue on the 14th day of birth. TRH-DE is found in amniotic stem cells and amniotic tissue. When Rox3 was introduced into amniotic stem cells, TRH-DE was found, BMP2 was added, and the differentiation of ivory bud cells was found after 21 days of culture. The three-dimensional culture system, HAP/TCP mixture and in vivo transplantation of fine tubule dentin formation on demineralized dentin matrix were confirmed.

项目成果

The side population cells isolated from porcine dental pulp tissue with self-renewal and multipotency for dentinogenesis, chondrogenesis, adipogenesis and neurogenesis.

从猪牙髓组织中分离出的侧群细胞具有自我更新和多能性，可用于牙本质发生、软骨发生、脂肪发生和神经发生。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Stem Cells 24・11
• 作者: Iohara K;Zheng L;Ito M;Tomokiyo A;Matsushita K;Nakashima M
• 通讯作者: Nakashima M

歯の再生 歯の発生生物学から歯の再生研究まで 第4章 歯の再生 7.歯髄幹細胞を用いた象牙質・歯髄再生

牙齿再生 从牙齿发育生物学到牙齿再生研究第4章牙齿再生7.利用牙髓干细胞进行牙本质和牙髓再生

• 发表时间: 2006
• 作者: IOHARA K;ZHENG L;ITO M;TOMOKIYO A;MATSUSHITA K;NAKASHIMA M;Nakashima M;中島美砂子;中島美砂子
• 通讯作者: 中島美砂子

Runx3 negatively regulates Osterix expression in dental pulp cells.

• DOI: 10.1042/bj20070104
• 发表时间: 2007-07
• 期刊: The Biochemical journal
• 作者: Li Zheng;K. Iohara;M. Ishikawa;T. Into;T. Takano-Yamamoto;K. Matsushita;M. Nakashima

Handbook of Biomineralization. Tissue Engineering of Tooth. Vol.3. Chapter 17

生物矿化手册。

• 发表时间: 2007
• 作者: Nakashima M;Iohara K;Zheng L;Nakashima M
• 通讯作者: Nakashima M