グリセロ糖脂質の高感度絶対配置決定法の開発研究

高灵敏甘油糖脂绝对构型测定方法的研发

基本信息

批准号：
07660129
负责人：
西田芳弘
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、動植物の細胞壁に広く存在する糖グリセリドの絶対配置を、極微量に決定する方法を確立する事である。これまで、旋光度や円偏向二色性スペクトル法などが報告されているが、天然に存在する糖グリセリドは微量であり、しかも、スペクトル分析の試料とするには、精密な精製、並びに絶対配置既知のモデル化合物が必要であるなどの問題が指摘されていた。先に、我々は、光学活性アルコール、アミンの絶対配置並びに光学純度を微量の試料で決定するための蛍光性不斉誘導体化試薬、(S)-TBMBカルボン酸を開発する事に成功している。本研究では、糖グリセリドのグリセロール部位の絶対配置を本試薬で決定する方法の開発を試みた。以下にその結果と成果をまとめた。1)グルコースと市販の(S)-グリシドールから、絶対配置既知のグルコシルグリセリドを立体選択的に合成する方法を確立し、これをモデル化合物に用いて分析法の開発を試みた。2)糖グリセリドのグリセロール部位を立体配置保持のままキラルグリセロール誘導体に導く方法を検討し、アシル基のアルカリ加水分解、完全メチル化、グリコシル結合の酸加水分解についてを含むスキームを考案し、各段階における最適条件を設定する事ができた。3)上述法により得られた光学活性グリセロールを(S)-TBMBカルボン酸によりラベル化し得られるジアステレマ-を順相系HPLC条件によって相互分離する条件を設定した。4)モデル糖グリセリドを用いて、(2)と(3)の操作法をさらに最適化し、目的とする糖グリセリド分析法を確立する事に成功した(別紙論文1、2)。本分析法は、0.05ピコモル量の検出感度で分析でき、これにより、極微量の試料で確実に、糖グリセリドグリセロールの絶対配置の分析が可能となった。さらに、糖部位の絶対配置を決定する方法も同時に確立し(文献3)、これにより、糖グリセリドん分子全体の絶対構造解析法が確立された事になる。

这项研究的目的是建立一种确定糖甘油酸甘油三酸酯绝对构型的方法，这些方法广泛存在于动物和植物的细胞壁中，含量极少。以前，已经报道了光学旋转和循环偏转二分色谱法，但已经指出了问题，例如，自然存在的糖甘油酸是痕量的事实，并且必须将具有已知绝对构型的精确纯化和模型化合物用作光谱分析的样品。早些时候，我们已经成功地开发了（S）-TBMB羧酸，这是一种用于确定光学活性醇的绝对构型和光学纯度的荧光不对称衍生化试剂，在微量样品中。在这项研究中，我们试图开发一种使用该试剂确定糖甘油酯甘油位点的绝对构型的方法。结果和结果总结在下面。 1）我们已经建立了一种立体选择性合成葡萄糖基甘油酸酯的方法，该方法具有葡萄糖和市售（S） - 甘氨酸的已知绝对构型，并试图使用它作为模型化合物来开发一种分析方法。 2）我们研究了一种将糖甘油酸甘油甘油三酸酯的甘油位点引导到手性甘油衍生物的方法，同时保持其构型，并设计了一种方案，其中包括酰基糖基的碱性水解，完全甲基化的甲基化和酸水解糖基键，并在每个阶段设置最佳条件。 3）用上述方法获得的光学活性甘油用（S）-TBMB羧酸标记，以及通过通过正常相HPLC条件相互分离所获得的非对映异构体而获得的非对映异构体。 4）使用模型糖甘油酯，我们进一步优化了程序（2）和（3）以建立所需的糖甘油三酸酯分析方法（附录论文1和2）。可以通过0.05 picomol的检测灵敏度来分析这种分析方法，从而确保可以在极少量的样品中信心分析糖甘油酸甘油三酸酯甘油的绝对构型。此外，还建立了一种确定糖位点绝对构型的方法（参考文献3），这导致为整个糖甘油类分子建立了一种绝对结构分析方法。