权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

唾液分泌におけるNa/K/2Cl共輸送体活性化機構

唾液分泌中Na/K/2Cl协同转运蛋白激活机制

基本信息

批准号：
07670073
负责人：
村上政隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670073/
关键词：
Salivary secretion Na k 2cl cotransport N-14 NMR K-39 NMR K flux

项目摘要

アンモニウム-パルス法によりNa/K/2Cl共輸送体を介し細胞内へNH_4^+が流入することをTurnerらは細胞内pH測定により見いだしたが、我々はN-14NMRにより細胞内NH_4^+量増加を直接測定し、さらにInversion recovery NMR法にて細胞内K^+の脱出を測定した。本年度はこのKイオン流出経路と共輸送体活性化の関係を分析することにあった。ラット顎下唾液腺を血管灌流し、静脈よりの流出液を30秒毎に採取、Kを炎光光度計にて測定した。結果:1)NH_4Cl20mMを灌流すると、流出液のK濃度は急速に上昇し初期1-2分でピーク値(5mM)を示した。その後低下し、約4-5分でプラトー(4.6mM)となり、15-20分でさらに低下し30分でほぼ流出は停止した(4.4mM)。これは、K流出経路に最低2種類あることを示している。2)ouabain 1 mMは、初期ピーク値、プラトー値共に増加させ(peak5.5mM,plateau 4.8mM)、Na/K ATPaseが細胞内のアンモニウム増加時にもK取込み活性を持つことを示した。3)bumetanide 50 μMは、K流出に対し有意な変化を起こさなかった(peak 5mM,plateau 4.6mM)が、アンモニウム除去後のK取込みの一部はbumetanide感受性であり、Na/K/2Cl共輸送によると結論された。4)K流出経路のCa依存性を調べた。細胞外のCaを除去し、さらに細胞内Caストアを枯渇させるために、acetylcholine 1 μMで刺激した。その上でouabain 1 mMを添加し、NH_4Cl20mMを灌流した。Ca=0ではK流出の初期ピークは抑制された(4.7mM)が、plateau値は抑制されなかった(4.7-4.8mM)。この結果は初期K流出はCa依存性の輸送経路によるものと結論される。今回、細胞内アンモニウム増加時に、Ca依存性のK流出が細胞内の陽イオン-ホメオスタシスに重要な役割を果たすことが明かになった。

アンモニウム-パルス法によりNa/K/2Cl co-transporter をmediated しintracellular NH_4^+がflow into することをTurner らはpH measurement is done directly by N-14NMR and the amount of intracellular NH_4^+ is increased. Direct measurement is done by Inversion. The recovery NMR method is used to measure intracellular K^+ extraction. This year's analysis of the relationship between the outflow path and the activation of the co-transporter was carried out. The submandibular salivary gland and vascular perfusion were collected, and the venous effluent was collected every 30 seconds, and measured using a K-pyrophotometer. Results: 1) The concentration of NH_4Cl20mM in the perfusion solution and the K concentration in the effluent increased rapidly during the initial 1-2 minutes, and the concentration of NH_4Cl20mM (5mM) was determined.その下注し, 4-5 minutes of でプラトー(4.6mM) and となり, 15-20 minutes of でさらにlower し30 minutes of でほぼoutflow and cessation of した(4.4mM).これは, K outflow 猌路にThe lowest 2 types of あることをshow している. 2) Ouabain 1 mMは, initial ピークvalue, プラトーヤにincreased させ(peak5.5mM, plateau 4.8mM), Na/K The activity of ATPase in the cell increases when the time is increased, and the activity of the ATPase in the cell is maintained. 3) bumetanide 50 μMは、K efflux and plateau 4.6mM) が、アンモニウムAfter removal のK 込みの一一bumetanide sensitivity であり、Na/K/2Cl co-delivery によると Conclusion された. 4) The Ca dependence of K outflow path is adjusted. Extracellular Ca is removed, intracellular Ca is removed, and acetylcholine 1 μM is stimulated.その上でouabain 1 mMをaddedし, NH_4Cl20mMをperfusionした. Ca=0 means that the initial outflow of Ca=0 is suppressed by ピークは (4.7mM), and plateau is suppressed by されなかった (4.7-4.8mM). The result is the initial K outflow and the Ca dependence of the transport path is the conclusion. This time, intracellular anabolic tract increases time, Ca-dependent K efflux into intracellular阳イオン-ホメオスタシスにimportantなservice cutをfruitたすことが明かになった.