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多核種NMR法による唾液腺導管細胞のK分泌Na吸収とエネルギー代謝共役の研究

多核素核磁共振法研究唾液腺导管细胞K分泌Na吸收与能量代谢耦合

基本信息

批准号：
04670058
负责人：
村上政隆
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670058/
关键词：
唾液腺導管細胞核磁気共鳴法高密度培養 ATP クレアチンリン酸 UDPG

项目摘要

上皮膜における水、電解質の輸送機構を研究するため、輸送量が多く、刺激に応じて輸送の活性化が明確である唾液腺を材料に血管灌流系のイオン測定、NMR測定が行われ大きな成果を上げてきた。臓器レベルの実験系には数種類の細胞が含まれ、全体の結果として、80%存在する腺房細胞の情報を反映するものであった。次のステップとして約10%の導管細胞のイオン輸送機能の評価が必要とされる。今回の研究では、高密度に培養導管細胞に固定してNMR測定するためにlowmelting agarose法を適用した。細胞/寒天混合物を氷冷し、寒天/細胞の糸(cell/agarose thread)とし、この表面を酸素を飽和させた灌流液で絶えず洗い流すことにより、細胞環境を生理的状態に保った。細胞は、ヒト顎下腺導管由来細胞(HSG)、HSG株より誘導した腺房細胞の特徴をもつAZA3株を用いた。NMR測定システムとしては、スペクトロメータにはBRUKER AMX400、磁石はOxford 9.45 T広口径超伝導磁石を用いた。長時間(10-15時間)のコントロール実験でATP含量は維持されており、灌流条件が満足のゆくものであることが示された。^<21>P NMRスペクトル上には以下の11の共鳴線が観測された。全観測可能燐化合物量に対する相対値は、phosphomonoester(PME)25.9%、inorganic phosphate(Pi)10.0%、phosphodiesters(PDE、3components)14.9%、creatine phosphate(PCr)1.8%、adenosine triphosphate(ATP、3 resonance peaks)20.8%、uridine diphosphoglucose(UDPG、2 resonance peaks)26.6%であった。分泌刺激及び抑制の為にacetylcholine、ouabain、isoproterenolを灌流系に添加し、燐化合物の変化を調べた。これらの刺激薬、抑制薬で起こされた変化は、非常に小さいものであった(<10%)。無機燐の化学シフトより計算したpHも安定した値を示した。pHは通常7.2であったが、0.1pH以下の変化であった。すなわち、固定化した培養細胞のacetylcholineなどに対する反応は臓器レベルの反応から予測されるものよりかなり小さいことが判明した。同じ細胞を用いた細胞レベルの酸素消費量変化も燐化合物の小さい変化と一致した。一方、興味深い観察結果も得られた。非常に大きなUDPG(主にuridine diphosphoglucose)が、ラットではそれほど大量には観察されないが、ヒトの唾液腺では導管由来のもの(HSG)にも、腺房の性質をもつもの(AZA3)にも観察された。この理由は現在検討中である。

Research on the transport mechanism of water and electrolyte in epithelial membrane, large transport volume, stimulation of transport and activation of transport The results of clarification of the salivary gland material, vascular perfusion system, and NMR measurement were carried out. There are several types of cells in the system, the overall result is the same, and 80% of the glandular cells are present and the information is reflected. The transport function of about 10% of the ductal cells is necessary. This time's research is based on the application of high-density culture of ductal cells, fixation, and NMR measurement using the lowmelting agarose method. cell/agarose thread), the surface is acidic, the perfusate is saturated, the perfusate is clean, the flow is clean, the cell environment is physiological, and the physiological state is maintained. Cells, HSG cells derived from submaxillary gland ducts (HSG), HSG strain HSG-induced gland cells, and special AZA3 strain cells were used. Used for NMR measurement of システムとしては, スペクトロメータには BRUKER AMX400, magnet and Oxford 9.45 T広diameter super-conducting magnet. The long-term (10-15 hours) maintenance of ATP content and perfusion conditions can be maintained. ^<21>P NMR スペクトル上には下の11の resonance line が禳measure された. The total amount of possible phosphorus compounds measured is: phosphomonoester (PME) 25.9%, inorganic phosphate (Pi) 10.0%, phosphodiesters (PDE, 3 components) 14.9%, creatine phosphate (PCr) 1.8%, adenosine triphosphate (ATP, 3 resonance peaks) 20.8%, uridine diphosphoglucose (UDPG, 2 resonance peaks) 26.6%. Secretion stimulation and inhibition include the addition of acetylcholine, ouabain, and isoproterenol to the perfusion system, and the modification and adjustment of sulfide compounds.これらのstimulating 薬, inhibiting 薬でこされた変化は, very small さいものであった (<10%). Inorganic pyrolysis chemistry is used to calculate the pH value and stabilize the pH value. The pH value is usually 7.2, and the pH value is below 0.1.すなわち、immobilized したcultured cells のacetylcholine などに対するanti応は燓器レベルの Reflection 応から Predicted されるものよりかなり小さいことがdetermined した. The same amount of phosphoric acid and chemical compounds used in the same cell is used. On the other hand, the results of the observation are very interesting. Very big UDPG (main uridine) diphosphoglucose)が、ラットではそれほど a large number of には観草されないが、ヒトのSalivary gland では duct origin のもの(HSG) にも, glandular duct の properties をもつもの(AZA3) にも観看された.このREASON はNow I am discussing with である.