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^<35>Cl NMRによる唾液線細胞内Clの動態計測

^<35>使用 Cl NMR 测量唾液腺细胞中 Cl 的动态

基本信息

批准号：
01570052
负责人：
村上政隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570052/
关键词：
外分泌腺唾液腺水分泌細胞内Cl NMR(核磁気共鳴)シフト試薬

项目摘要

外分泌腺の水分泌は管腔側膜からのCI分泌が細胞間隙あるいは細胞から水、Naを引き込むモデルが提出されているが、細胞内を通過するCIの動きは明らかでない。今回、化学シフト試薬としてCo(EDTA)を用い、唾液腺細胞内CIのNMR(核磁気共鳴)測定が可能になった。方法:ラット(オス、Wistar)の顎下腺(0.2・0.3g)を摘出し、定流灌流した(2ml/min、25oC)。8.45Tの高分解NMR装置(BrukerWM360wb)に広帯域プロ-ブを35.28MHzに同調して用いた。細胞内外のClー35のNMR信号を分離するために化学シフト試薬としてCo(EDTA)20mMを灌流液に添加し用いた。1.Co(EDTA)20mMにより灌流液のCl_ー35のNMR信号は1.245ppm低磁場側にシフトした。静止時の細胞内Clの信号は細胞外の信号の裾に埋もれ観測困難であり、静止時よりの変化を差スペクトルで観察した。2.acetylcholine lμM投与によりOppmの信号が僅かに増大した。3.ouabain lmMをAChに重畳すると0.97ppmの信号が連続的に増大した。Oppmの信号の変化は追跡不能であった。細胞外のCI増加は細胞外液区画の浮腫を示している。4.acetylcholine 1mM投与ではOppm近辺の信号が1μMに比べ大きく増加した。高濃度acetylcholineで細胞内Naの著しい増加を報告したが、同時にClも増加することが示された。細胞内Naは刺激直後急速に増加したが、細胞内Clは10分以降にも増加しつづけた。今回の実験ではacetylcholineによる細胞内Clの増加が明らかになった。しかし、5%以内と見積られる浮腫が細胞外Cl量を増加させ、細胞内Clの追跡を困難なものにした。これまで高灌流流速による細胞外区画の浮腫は約30分の灌流で安定することが腺重量測定より示されているが、今回の浮腫は僅かなものではあるが細胞内Clの追跡のために克服しなければならない。

The exocrine glands secrete water, lumen, CI, intercellular space, intercellular fluid, water, Na, CI, CI, and so on. This time, Co (EDTA) and salivary gland intracellular CIRC NMR (nuclear magnetic resonance) were used to determine the possible phenotype. Methods: the subglandular gland (0.0.3g) was extracted and perfused with 2ml/min (2ml/min, 25oC). 8.45T High decomposition NMR device (BrukerWM360wb). The domain is the same as that of the 35.28MHz. The extracellular and extracellular Cl 35 NMR signals were separated from each other and added to the perfusate of Co (EDTA) 20mM. 1.Co (EDTA) 20mM perfusate Cl_ 35 NMR signal 1.245ppm low magnetic field. When at rest, the intracellular Cl signal, the extracellular signal, the intracellular signal, the extracellular signal, the intracellular signal, the extracellular signal, the intracellular signal, the extracellular signal, the intracellular signal, the extracellular signal, the intracellular signal, the extracellular signal, the signal. 2.acetylcholine 1 μ M throws the signal "Oppm" with the signal "big". The 3.ouabain lmM "ACh" repeats the "big" of the 0.97ppm signal link. The Oppm signal cannot be tracked down. The extracellular CI is added to the extracellular fluid area to draw the float to show the extracellular fluid. The signal of 4.acetylcholine 1mM is larger than that of the signal "1 μ M". The signal "1 μ M" is higher than that of the Oppm. The intracellular Na of high-quality acetylcholine system will increase the report cycle, and at the same time, Cl will add the report report to show the performance. After the stimulation of intracellular Na, it was rapidly increased by 10 points of intracellular Cl in order to decrease the number of trophoblasts and increase the number of trophins. This time, you will need to acetylcholine the intracellular Cl concentration and add the information to it. The levels of extracellular Cl and intracellular Cl were increased in the first half of the year. The extracellular area was drawn at a high perfusion velocity by 30 minutes or so. The weight of the gland was measured by diazepam and diazepam. The weight of the gland was measured. This time, the intracellular Cl was traced and overcame the problem.