平滑筋における受容体作動性Ca透過型陽イオンチャネルのリン酸化による制御機構

平滑肌受体操纵的钙渗透性阳离子通道的磷酸化控制机制

基本信息

批准号：
07670110
负责人：
井上隆司
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平滑筋受容体作動性陽イオンチャネルの制御機構に関する研究の一環として、モルモット回腸のムスカリン受容体刺激で開口する陽イオンチャネル(mNSCCs)に対するリン酸化の役割について検討した。(1)高い温度依存性を有することが明らかになった(15-25度で測定したQ10値が約5.0であった)。この性質はGTPγSを細胞内灌流してmNSCCを直接活性化しても観察されることから、受容体より下流の情報伝達系を介した効果であると考えられた。(2)細胞内をATPあるいはMg欠除液で灌流すると、mNSCC電流振幅は時間経過に依存する著明な減少を示した(nundown)。このrundownはmMオーダーのMgATPを電極内に再添加することによって有意に遅延させることができた。(3)creatime phosphate(1-10mM)や解糖系を介したATP産生の主要基質(NAD+, ADP, fructose 1, 6-diphosphate, phoshporic acid)を細胞内灌流した場合にも、(2)と同様のrundownの遅延効果が見られ、この効果もMg要求性であった。(4)ナイスタチン法を用いてmNSCC電流を安定化させた後、細胞外のブドウ糖を除去すると緩やかな電流振幅の減少が見られた。この効果はブドウ糖をD-deoxyglucoseで置換すると促進され、同時に電位依存性Ca電流の抑制も観察された。(5)以上のことからmNSCC電流の活性維持にはATPを介した高い温度依存性をもつ制御機構(おそらくリン酸化)が関係しており、これにはcreatine phosphateを介したエネルギー分配系や膜直下で働く解糖系を介したエネルギー供給が特に重要であることが示唆された。結果の一部は、学会発表され(第68回日本薬理学会総会、第48回西南部会)、またProceedings of International Symposium "Smooth Muscle"に出版されている。更に関連した総説として福岡医学雑誌(1996)に印刷中である。

作为平滑肌受体侵蚀性阳离子通道机制的研究的一部分，我们研究了磷酸化对豚鼠猪油中毒蕈碱受体刺激开放的阳离子通道（MNSCCS）的作用。（1）揭示其具有高温依赖性（在15-25度下测得的Q10值约为5.0）。即使在细胞内灌注并直接激活MNSCC时，也观察到该特性，因此被认为是通过受体下游的信号系统的效果。（2）当细胞用ATP或MG耗竭溶液灌注时，MNSCC电流幅度显着降低了时间依赖性的还原（NONDOWN）。通过将MM级MGATP重新添加到电极中，可以显着延迟此量。（3）当糖酵解产生（NAD+，ADP，果糖1，6-二磷酸，6-二磷酸，磷酸）的乳脂时间磷酸盐（1-10 mm）和主要底物被细胞内灌注时，与（2）中的破发作用相同，MG也需要（2）中的效果。（4）使用Nystatin方法稳定MNSCC电流后，去除细胞外葡萄糖以显示电流振幅的轻微降低。当葡萄糖被D-脱氧葡萄糖代替时，这种效果得到了促进，同时，也抑制了电压依赖性的Ca电流。（5）这些结果表明，通过ATP高度依赖温度依赖性调节机制（可能是磷酸化）参与了MNSCC电流的活性，并且通过磷酸盐和糖酵解系统的能量分布系统尤为重要，该系统尤其重要。一些结果已在会议上（日本药理学协会第68次股东大会，第48届西南会议），并发表在国际研讨会“平滑肌”会议上。它是在《福冈医学杂志》（1996年）中作为更相关的评论中的。