細菌のサイリックADPリボース合成酵素の精製とその物理化学的性状

细菌环ADP-核糖合酶的纯化及其理化性质

• 批准号: 07670305
• 负责人: 唐澤 忠宏
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670305/
• 关键词: cyclic ADP-ribose; Streptococcus pyogenes; NAD

1.患者由来 A 群溶血レンサ球菌34株,C群28株,D群30株についてNAD分解酵素の産生能を検討したところ,A群,その中でも特定のT血清型(T-1,T-3,T-4,T-12)の菌株の本酵素産生能が高いことが明らかになった.2.A群溶血レンサ球菌(streptococcus pyogenes)C2556の24時間培養上清からNAD分解酵素の精製を行った。酵素活性の指標としてマイクロタイタ-プレート蛍光法を用いた.80%硫安塩析、およびイオン交換(CM SepharoseCL-6B)、ゲルろ過(Sephacryl S-200HR)、ヒドロキシアパタイト(Gigapite)クロマトグラフィーによって精製した。収量は4.2%,精製率は1490倍であった.3.本酵素について、酵素学的・物理化学的性状を検討した.1)分子量:SDS-PAGEにて50,0002)Specific activity(NAD分解活性):890μmol/min/mg3)Km 値:200μM4)至適pH:7.44.精製した酵素を用いてさらに詳細な解析を行い、本酵素がサイクリックADPリボース合成活性および分解活性を有していることを明らかにした。本研究により,これまで真核生物でのみ見つかっていたサイクリックADPリボース代謝酵素が原核生物においても存在することが初めて明らかになった.

1. 34 strains of streptococci group A, 28 strains of streptococci group C and 30 strains of streptococci group D were detected for NAD decomposing enzyme production activity, and strains of streptococci group A and T serotypes (T-1,T-3,T-4,T-12) were detected for NAD decomposing enzyme production activity. The enzyme activity index was determined by spectrophotometry. 80% sulfur analysis, chromatography (CM Sepharose CL-6B), chromatography (Sephacryl S-200HR), and purification were used. 3. Enzymatic and physicochemical properties of the enzyme were investigated. 1) Molecular weight:SDS-PAGE: 50,0002)Specific activity:890μmol/min/mg3)Km value:200μM4) pH value:7.44. Purified enzyme: Detailed analysis of enzyme activity, enzymatic and physicochemical properties of the enzyme. In this study, eukaryotes were found to have metabolic enzymes that existed in prokaryotes.

项目成果

K.Nakagawara: "Assignment of CD38, the gene encoding human leukocyte antigen CD38(ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase), to chromosome" Cytogenetics and Cell Genetics. 69. 38-39 (1995)

K.Nakakawara：“将编码人类白细胞抗原 CD38（ADP-核糖基环化酶/环状 ADP-核糖水解酶）的基因 CD38 分配给染色体”《细胞遗传学和细胞遗传学》。

T.Karasawa: "NAD^+-glycohydrolase productivity of haemolytic streptococci assayed by a simple fluorescent method and its relation to T serotype" FEMS Microbiology Letters. 128. 289-292 (1995)

T.Karasawa：“通过简单荧光方法测定的溶血性链球菌的NAD β -糖水解酶生产力及其与T血清型的关系”FEMS微生物学快报。

T.Karasawa: "NAD^+-glycohydrolase from streptococcus pyogenes shows cyclic ADP-ribose forming activity" FEMS Microbiolgy Letters. 130. 201-204 (1995)

T.Karasawa：“来自化脓性链球菌的NAD β -糖水解酶显示出环状ADP-核糖形成活性”FEMS微生物学快报。