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レンサ球菌サイクリックADPリボース合成・分解酵素の病原的役割の探索

链球菌环ADP-核糖合成/降解酶致病作用的探索

基本信息

批准号：
10770114
负责人：
唐澤忠宏
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1.前年度に引き続き,レンサ球菌cADPR合成・分解酵素遺伝子をクローン化・発現させた大腸菌をマウスの腹腔内に生菌投与したが、対照群と比較して特別な所見(病的所見)は観察できなかった。また,ヒト血液の殺菌能に対する抵抗性を検討したが,対照群と比較して有意差が観察されなかった。2.本酵素の活性に関与するアミノ酸残基について部位特異的変異体を用いて解析した。親・疎水性プロット・二次構造予測、エクソン・イントロン構造などを考慮して,レンサ球菌酵素、A.CalifornicaおよびA.Kurodai cADPR合成酵素、ラットおよびヒトCD38(cADPR合成・分解酵素)を比較すると、9個のアミノ酸残基が上記全て酵素で保存されており、またさらにレンサ球菌酵素とCD38でこの他に11個のアミノ酸残基が保存されていた。ヒトCD38のcADPR結合部位であるK129に相当するレンサ球菌酵素K162に変異を導入したところ、K162AおよびK162R変異体はcADPR合成活性を示したが分解活性は示さなかった。一方、E307AおよびE307D変異体はcADPR合成活性を示さなかったが分解活性は保持していた。さらに、このGlu残基の重要性を解析するために、レンサ球菌酵素E307に相当するヒトCD38E226における変異体を作製したところ,E226DおよびE226QCD38はcADPR合成活性を示さなかったが分解活性は保持していた。以上の結果は、レンサ球菌cADPR合成・分解酵素のE307およびK162が,それぞれcADPR合成反応およびcADPR分解反応に必須のアミノ酸残基であり、これら残基が細菌から哺乳動物まで進化的に保存されていることを示唆している。

1. In the past year, the production and degradation of ADPR by Escherichia coli were detected in the abdominal cavity. For example, if you want to compare the resistance of blood with that of other blood samples, you can compare the resistance of blood samples with that of other samples. 2. Analysis of site-specific variants related to the activity of this enzyme Pro-aqua-pro-aqua (cADPR synthetic/catabolic enzyme) 9 amino acid residues were preserved in the above enzyme, 11 amino acid residues were preserved in the above enzyme, and 11 amino acid residues were preserved in the above enzyme. CD38 cADPR binding site K129 is equivalent to the enzyme K162, and the enzyme K162A and K162R are introduced into the enzyme. E307A and E307D are different from cADPR synthesis activity. The importance of Glu residues was analyzed by enzyme E307 and its corresponding enzyme CD38 E226. The enzyme E226D and E226 QCD38 showed that the activity of cADPR synthesis was maintained. These results indicate that E307 and K162 are essential for the synthesis and decomposition of cADPR in bacteria and mammals.