細菌蛋白毒素のcyclic ADP-ribose合成酵素活性の検出

细菌蛋白毒素环ADP-核糖合酶活性检测

基本信息

  • 批准号:
    06770198
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.NAD分解酵素活性を検出する際に、従来のマイクロタイタ-プレート蛍光法を改良し、簡便に酵素活性を定量化できるように工夫して、大量の試料を取り扱えるようにした。2.上記方法を用いて種々の細菌の培養上清および菌体抽出液をスクリーニングしたところ、ある種の細菌の培養上清はNAD分解酵素活性が非常に高いことがわかった。3.この細菌の培養上清について、研究実施計画3)に記した方法でcADP-ribose合成活性を測定したところ、同活性を示すことが明らかになった。4.この培養上清からcADP-ribose合成酵素の精製を行った。硫安塩析、およびゲルろ過、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーによって精製した。5.精製した酵素を用いてさらに詳細な解析を行い、本酵素がcADP-ribose合成活性のみならずcADP-ribose分解活性をも有していることを明らかにした。6.本酵素について、反応速度と時間の関係、至適pHおよび金属イオンの酵素活性に与える影響について検討した。以上の結果から、真核生物のみならず原核生物でも、cADP-ribose合成・分解酵素活性を有する蛋白を産生することを明らかにした(論文投稿中)。今後は、分子量・等電点・アミノ酸解析・Km・Vmax等の検討によって同酵素の酵素学的性状を明らかにすることを中心に研究を進める予定である。
The activity of 1.NAD decomposing enzyme was improved by photolysis, quantitative determination of enzyme activity by stool, and a large number of materials were collected. two。 In the last method, the supernatant of bacteria culture was used to detect the activity of NAD decomposing enzymes in the supernatant of bacteria culture. 3. The supernatant of the bacteria was cultured and the supernatant was studied. 3) the method of cADP-ribose synthesis activity was used to determine the activity of the supernatant. 4. The supernatant was incubated and the cADP-ribose synthesis enzyme was purified. Thioampere analysis, contact, communication and communication, please tell me what to do. 5. The activity of cADP-ribose synthesis, the activity of cADP-ribose decomposition, the activity of cADP-ribose decomposition, the activity of enzyme, the activity of enzyme synthesis, the activity of cADP-ribose decomposition, the activity of enzyme synthesis, the activity of cADP-ribose decomposition. 6. This enzyme is sensitive, the reaction rate is time-sensitive, and the activity of the enzyme from pH to metal is sensitive to temperature. The results of the above results showed that the activity of cADP-ribose biosynthetic enzymes in prokaryotes, eukaryotes, and eukaryotes was not affected by the activity of protein synthesis. In the future, molecular weight and other electronic points were used to analyze the characteristics of isozymes in Km ·Vmax and other enzymes. The study was conducted in the center of the laboratory.

项目成果

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