ホルモン依存性細胞増殖、分化及び細胞死に関与する新しい因子の検索

寻找参与激素依赖性细胞增殖、分化和细胞死亡的新因子

• 批准号: 07671171
• 负责人: 宮本 薫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671171/
• 关键词: 卵胞; クロマトグラフィー; 顆粒膜細胞

ラット卵巣から、コラゲナーゼ処理によって2-3層の顆粒膜細胞を有する卵胞を単離し、2%血清存在下に浮遊状態で培養を行った。培養後、卵胞の組織切片を作成し顕微鏡下で卵胞の形態および大きさの変化、さらに顆粒膜細胞のAppoptosisの有無を定量的に測定し、細胞増殖、分化、細胞死それぞれの活性の指標とする。DESを投与したラット1000匹から卵巣を集め、DES刺激した卵巣の抽出物を得た。この抽出物中には、顆粒膜細胞に対する増殖因子および細胞死因子が高濃度に含まれていた。またPMSGを投与したラット1000匹からも卵巣を集め、PMSG刺激した卵巣の抽出物を得た。これらの抽出物中より顆粒膜細胞に対する増殖因子、分化因子、細胞死因子をそれぞれ上記のアッセイシステムを用いて精製を試みた。まず抽出液をDEAEおよびCM-Sepharoseによるイオン交換クロマトグラフィーにより分画し、さらにゲル濾過、Hysrophobicクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーにより精製した。高速液体クロマトグラフィーによって、最終的に精製された標品を得た。精製された標品をアミノ酸シークエンサーで分析し、部分アミノ酸配列を決定した。決定されたアミノ酸配列の情報をもとにオリゴヌクレオチドプローブを合成し、卵巣のcDNAライブラリーから、これら増殖、分化、細胞死の各因子のcDNAをクローニングすることを現在試みている。得られたcDNAの塩基配列をDNAシークエンサーを利用して決定し、各因子の構造を明らかにしたい。さらにこれらのcDNAを発現ベクターに組み込み、動物細胞で発現させ、これらの因子の作用機構の解明に利用して行きたい。

ラ ッ ト eggs 巣 か ら, コ ラ ゲ ナ ー ゼ 処 Richard に よ っ て 2-3 の granular membrane cells を す る follicle を 単 from し, 2% serum in the presence of に floating state line で cultivate を っ た. After training, the follicle の biopsy を made し 顕 micro microscopically で follicle の form お よ び big き さ の variations, さ ら に granular cell membrane の Appoptosis の presence of を quantitative determination of に し, differentiation, cell death, cell rights colonization そ れ ぞ れ の の activity index と す る. DESを was administered to たラット たラット1000 <s:1> ら oocyte を sets め, and DES stimulated the extract of <s:1> た た oocyte sills を to obtain た. The <s:1> extract contains a high concentration of に に, granule membrane cells に, する proliferating factor および, death factor が, に and まれて た た た. Cast with し ま た PMSG を た ラ ッ ト 1000 か ら も eggs 巣 を め, PMSG stimulus し た eggs 巣 の extract を た. こ れ ら の extract in よ り granular cell membrane に す seaborne る raised yield factor, differentiation factor, cell death factor を そ れ ぞ れ written の ア ッ セ イ シ ス テ ム を with い て refined を try み た. ま ず extract を DEAE お よ び CM - Sepharose に よ る イ オ ン exchange ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り painting し, さ ら に ゲ ル filtration, Hysrophobic ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー, anti-phase ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り refined し た. High-speed liquid ロ ロ トグラフィ トグラフィ によって によって によって, final に refined された standard product を た. Refined さ れ た standard product を ア ミ ノ acid シ ー ク エ ン サ ー し で analysis, partial ア ミ ノ acid with column を decided し た. Decision さ れ た ア ミ ノ acid with column の intelligence を も と に オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド プ ロ ー ブ を synthetic し, egg 巣 の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら, こ れ ら raised colonization, differentiation, cell death の each factor の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ す る こ と を now try み て い る. Have ら れ た cDNA の salt base with column を DNA シ ー ク エ ン サ ー を using し て decided し, each factor の structure を Ming ら か に し た い. さ ら に こ れ ら の cDNA を 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, animal cells で 発 now さ せ, こ れ ら の factor の role institutions の interpret に using し て line き た い.

项目成果

K. Miyamoto 他: "Type II and type IIB activin receptors in human placenta." Life Sciences in press.

K. Miyamoto 等人：“人类胎盘中的 II 型和 IIB 型激活素受体正在出版。”

K. Miyamoto 他: "Regulation of follistatin messenger ribonucleic acid in cultured rat" Mol. Cell. Endocrinol.109. 167-174 (1995)

K. Miyamoto 等人：“培养大鼠中卵泡抑素信使核糖核酸的调节”Mol Cell.167-174。