T3,T7ファージDNA詰込みにおけるDNA成熟機構と転写機能

T3和T7噬菌体DNA包装中的DNA成熟机制和转录功能

• 批准号: 07680737
• 负责人: 藤澤 久雄
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680737/
• 关键词: T3,T7ファージ; 頭部形成; DNA成熟; 詰込みシグナル; 転写活性; 特異性

線状2本鎖DNAの完全複製(末端の)は不可能であるが、ファージはDNAをコンカテマ-として合成し、それからDNAを切り出すこと(DNA成熟)によりゲノム構造を維持している。T3,T7ファージはDNA詰込みに必要な配列(pac配列)をプラスミドにクローンすると、これを認識して頭殼に詰め込み、形質導入する。形質導入系を用い、pac配列がDNA成熟における截断の標的配列(pacC)とファージRNAポリメラーゼプロモーター配列(pacB)からなること及びプロモーター活性と詰込み活性との間に高い相関があることが明らかになった。本研究ではT3,T7ファージのDNA成熟機構と転写機能との関連を解明する。(1)pacB配列変異体の解析により、転写は詰込みに必要ではあるが、十分でないこと及び転写と詰込みの方向が反対になるようなpacBとpacCの配置が必須であることが分った。また、T3 DNA上のいくつかのプロモーターの詰込み活性は複製起点活性と相関があった。(2)T7ゲノムDNAのpacBの代わりにT3 pacBを導入したキメラファージはT3,T7どちらのファージによっても詰め込まれた。T3,T7ゲノム右端にあるパリンドローム構造がDNA成熟に関わる可能性が主張されたが、この配列の欠失はファージの増殖過程には影響を与えなかった。(3)DNA合成阻害剤および転写阻害剤は共にin vitro DNA詰込み反応を阻害した。RNaseAはDNA詰込み反応に促進的であったが、RNaseHはそれを阻害した。in vitro詰込み反応をコンカテマ-形成、DNA成熟、DNA詰込みの素反応に分けて解析したところ、DNA合成阻害剤はコンカテマ-形成とDNA成熟反応を、転写阻害剤及びRNaseHはDNA成熟の開始反応を阻害し、これら処理はDNA詰込み反応自身を阻害しなかった。購入したウルトラスペックは組換えDNA実験の際、DNA定量に用いた。

Complete replication (terminal) of linear 2-locked-DNA is impossible. DNA synthesis is impossible. DNA cleavage is impossible. DNA maturation is impossible. T3,T7, and T8 are required to provide the necessary DNA sequences (pac sequences) to the computer, and they are recognized as important and essential in the head and shell. The plasmid introduction system uses medium, pac alignment, DNA maturation, truncated target alignment (pacC), RNA fragmentation, and RNA fragmentation, and high correlation between activity and activity. This study was designed to elucidate the relationship between DNA maturation mechanisms and transcription functions at T3 and T7. (1)PacB configuration is different from the analysis, writing, and writing. T3 DNA is the source of replication activity. (2)T7 T3,T7, T9, T T3,T7: The right side of the structure of the DNA is related to the possibility of DNA maturation, and the right side of the structure is related to the influence of DNA maturation. (3)DNA synthesis inhibitor is too complex to be in vitro DNA synthesis inhibitor. RNaseH is the most effective way to protect the environment. DNA synthesis inhibitor, DNA maturation inhibitor, DNA synthesis inhibitor, DNA synthesis inhibitor, DNA synthesis Buy it now! Buy it now!

项目成果

Morita, M.: "Structural and funvtional domains of the large subunit ofT3 phage DNA packaging enzyme" Journal of Molecular Biology. 245. 635-644 (1994)

Morita, M.：“T3 噬菌体 DNA 包装酶大亚基的结构和功能域”分子生物学杂志。

Tsuchida: "DNA sequences responsible for specificity of DNA packaging and growth intereerence of bacteriophage T3 and T7" Virology. 217(in press). (1996)

Tsuchida：“DNA 序列负责 DNA 包装的特异性以及噬菌体 T3 和 T7 的生长相互作用”病毒学。

Kawarabayashi, Y.: "An improved cosmid vector for the nested deletion method using the bacteriophage T3 DNA packaging system" DNA Research. 2(in press). (1996)

Kawarabayashi, Y.：“使用噬菌体 T3 DNA 包装系统进行嵌套删除方法的改良粘粒载体”DNA Research。

Morita, M.: "Analysis of the fine structure of the prohead binding domain of the packaging protein of T3 phage." Virology. 211. 516-524 (1995)

Morita, M.：“T3 噬菌体包装蛋白前头结合域的精细结构分析。”