活性酸素による細胞増殖因子レセプターキナーゼの活性化機構

活性氧激活细胞生长因子受体激酶的机制

• 批准号: 07680774
• 负责人: 蒲生 忍
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680774/
• 关键词: 上皮増殖因子; レセプター; チロシン; キナーゼ; リン酸化; 過酸化水素; 酸化ストレス

我々は、過酸化水素(H_2O_2)がEGFレセプターのチロシンリン酸化を促進することを見出した。このH_2O_2によるチロシンリン酸化機構について解析するため、EGFレセプターを持たないマウス細胞株A9に正常型およびキナーゼ活性欠損変異型EGFレセプター遺伝子を導入した細胞株を作製した。各細胞を^<23>P無機リン酸で標識しH_2O_2処理後、EGFレセプターを免疫沈澱し、電気泳動後、ホスホペプチドマッピング法でチロシンリン酸化部位を検出した。正常型EGFレセプター(Wtレセプター)を発現する細胞ではH_2O_2処理により顕著なWtレセプターのチロシンリン酸化(Tyr1068, 1086, 1148, 1173)が認められた。自己リン酸化能を欠きEGFではリン酸化が促進されない変異型EGFレセプター(721Mレセプター)においては、H_2O_2処理によりTyr1086と1173にチロシンリン酸化が認められた。一方、免疫沈澱法で精製したEGFレセプターでは、H_2O_2処理によりチロシンリン酸化促進は認められなかった。従って、H_2O_2はレセプターキナーゼを直接活性化しないが、H_2O_2により活性化されたキナーゼ(H_2O_2-TyrK)がEGFレセプターをチロシンリン酸化することが示唆された(準備中)。そこでA9細胞からH_2O_2-TyrKの精製を目的に、Triton X-100可溶性分画を調製しHiTrap Qカラムで粗分画し、免疫沈澱法で精製した721Mレセプターを基質に用いて検討した。H_2O_2処理した細胞の0.2-0.4M NaCl溶出分画にのみ721Mレセプターをチロシンリン酸化する活性が検出され、H_2O_2により活性化されるH_2O_2-TyrKの存在が証明された。さらに、膜近傍に存在するH_2O_2-TyrKが、酸化ストレス応答に重要な役割を果たすことが示唆された。

We found that H_2O_2 could promote the growth of EGF. The H_2O_2 gene was introduced into the normal cell line A9, and the EGF gene was expressed in the normal cell line A9. After <23>treatment with H2O2, EGF expression was detected by immunoprecipitation and electrophoresis. The normal EGF (Wt) was found in H_2O_2-treated cells. The normal EGF (Tyr1068, 1086, 1148, 1173) was found in H_2O_2-treated cells. In addition, EGF can be used to promote the growth of different EGF species (721M), and H2O2 can be used to treat different EGF species (Tyr1086 and 1173). A recipe, immunoprecipitation method, EGF treatment, H_2O_2 treatment, acidification promotion, etc. H_2O_2-TyrK is a new type of EGF. It can be directly activated by H_2O_2 and EGF. The purification of H_2O_2-TyrK in A9 cells was studied by using Triton X-100 soluble fractionation and immunoprecipitation. H_2O_2-TyrK activity was detected in 0.2-0.4M NaCl dissolution assay of H_2O_2-treated cells, and the existence of H_2O_2-TyrK was demonstrated. H_2O_2-TyrK is an important component in the process of acidification.

项目成果

Shimizu N et al: "Use of the growth factor receptor-mediated endocytosis for therapeutic gene delivery : Immunogene approach" Cellular Pharmacology. (in press). (1996)

Shimizu N 等人：“使用生长因子受体介导的内吞作用进行治疗性基因传递：免疫基因方法”细胞药理学。

高柳 淳 他: "臨床遺伝医学[VI]“遺伝子治療と予防"古庄敏行・清水信義 他編" 診断と治療社, 473 (1995)

Jun Takayanagi 等：“临床遗传医学[VI]“基因治疗和预防”Toshiyuki Furusho、Nobuyoshi Shimizu 等编辑。Diagnosis to Sairosha，473 (1995)

Gamou S et al: "Hydrogen peroxide preferentially enhances the tyrosine phosphorylation of epidermal growth factor receptor" FEBS Letters. 357. 161-164 (1995)

Gamou S 等人：“过氧化氢优先增强表皮生长因子受体的酪氨酸磷酸化”FEBS Letters。

Shimizu N et al: "The immunogene spproach toward cancer gene therapy using the EGF receptor-mediated gene therapy" Cancer Gene Therapy. (in press). (1996)

Shimizu N 等人：“免疫基因通过 EGF 受体介导的基因疗法进行癌症基因治疗”癌症基因治疗。

蒲生 忍 他: "最新医学からのアプローチ“細胞増殖因子"黒木登志夫 編" メジカルビュー社, 235 (1995)

Shinobu Gamo 等：“黑木敏夫编辑的最新医学“细胞生长因子”的方法”Medical View Publishing，235（1995）