マイクロダイアリシス/酵素電極法を用いた脊髄グルタミン酸放出の測定

使用微透析/酶电极法测量脊髓谷氨酸释放

• 批准号: 07680838
• 负责人: 小野 秀樹
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680838/
• 关键词: マイクロダイアリシス; グルタミン酸; 酵素電極; 脊髄

Galleyら(1992)はマイクロダイアリシス用のプローブとグルタミン酸(Glu)酸化酵素反応を組み合わせた新しいGlu測定法を開発している。私はこの方法をラット脊髄へ適用して生理的刺激で放出されるGluの測定と薬物作用機序の解明を試みた。本方法はプローブの透析膜を透過したGluから、Glu酸化酵素により過酸化水素を生成し、これを白金電極によりvoltammmetryで測定するものである。本研究では最初に妨害物質の影響を検討した。最初、本システムはGluよりもascorbic acidへの感度が約2倍高く、その他生体アミンも同様に検出した。この問題は白金電極へ0-phenylendiamineの被膜を作り過酸化水素以外の物質が電極に接触しないようにすることにより、ascorbic acidの反応はGluの1/(100)程度まで、noradrenalineの反応は1/(10)まで減少させることができた。次に、このプローブを麻酔ラットの第5腰髄に挿入し、座骨神経を20V、10H_Zで刺激しGlu放出の測定を試みたが、連続刺激によってもレベルの変化は観察されなかった。一方ラットを死亡させると100μMのGlu上昇が見られた。これらの結果により、白金電極を適切にコーティングすることにより、かなり選択的にGluを測定できるようになるが、生理的条件で増加するGluの検出は困難であることが判明した。初期に報告されている増加は、Gluだけではなく、妨害物質の増加も含まれていたと考えられる。今後、感度の上昇のためにはプローブを用いず、妨害除去用被膜、固定化酵素被膜を持つ多層被膜白金電極を用いる方法の検討、および増幅器の低ノイズ化などか考えられる。

Galley (1992) reverse enzyme complex acidified enzyme (Glu) was used to determine the concentration of maleic acid (Glu). A new Glu method was used to determine the activity of the enzyme. The method of private medicine is to determine the sequence of the action mechanism of the substance by using the physiological stimulation to release the Glu. In this method, the dialysis membrane was tested by Glu chromatography, Glu acidifying enzyme digestion through acidified water production, platinum electrode voltammmetry assay. At the beginning of this study, the nuisance substance had a negative effect on the quality of the drug. At the beginning, the sensitivity of the Glu is about 2 times higher than that of the ascorbic acid. Problem Platinum Electronics 0-phenylendiamine coating material other than acidified water, cathode contact temperature, ascorbic acid, Glu1