トリパノソーマ感染宿主細胞の増殖抑制とアポトーシスに関する分子生物学的解析

锥虫感染宿主细胞生长抑制和凋亡的分子生物学分析

• 批准号: 07807031
• 负责人: 嶋田 淳子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07807031/
• 关键词: トリパノソーマ; 宿主細胞; 増殖抑制; 分子生物学; アポトーシス

1.Trypanosoma cruziの錘鞭毛期(trypomatigote)、無鞭毛期(amastigote)について、マウス由来線維芽細胞(Swiss 3T3 fibroblast)を宿主細胞としたin vitro 感染モデル系を確立した。T. cruziの感染後、一定期間ごとに細胞をホルマリンで固定し、ヨウ化プロピジウム(PI)で核DNAを染色後、このPIのケイ光強度を顕微鏡分光装置を用いて測定し、宿主細胞の核DNA含量を定量した。2.PI染色の際、宿主細胞内のamastigoteの核も染まるため、amastigote数も同時に測定した。Amasigote数と宿主細胞の核DNA含量の相関について調べたところ、amastigoteが20個以上存在する感染細胞のDNA含量の平均値が高いことが明らかとなった。また、多数のamastigoteが感染した細胞の核DNA含量の分布は、コントロールと異なり、細胞周期のG1期からG2期までブロードなパターンを示した。これより宿主細胞の分裂、増殖制御はT. cruzi感染により損なわれていることが示唆された。3.T. cruzi感染細胞では、コントロールに比べて多核の細胞の割合が多いことから、細胞分裂の過程で、核分裂は起こるが細胞質分裂が進行しない可能性が考えられる。そこで、細胞質分裂に関与するアクチンの変化を調べるため、Rhodamine Phalloidinによる蛍光抗体法により細胞を観察したところ、感染細胞ではアクチンのストレスファイバーが認められなかった。次に、Western blotを行うため、抗体の検索を行った。抗回虫アクチン抗体は、宿主細胞およびT. cruziのアクチンと反応することがわかり、今後の解析に有用であることがわかった。4.細胞が死ぬ過程(アポトーシス)については現在検討中である。

1. Trypanosoma cruzi in trypomatigote and astigote stages is derived from Swiss 3T3 fibroblast and host cells in vitro infection. T. After cruzi infection, a certain period of time, the host cell nuclear DNA content was quantified by fluorescence microscopy after staining with PI. 2. At the time of PI staining, amastigote and nuclear staining in host cells were determined simultaneously. The correlation between the number of amasigotes and the nuclear DNA content of host cells was studied. The average DNA content of infected cells with more than 20 amastigotes was high. The distribution of nuclear DNA content in most astigote infected cells is shown in the following ways: 1. The host cell division, proliferation control T. Cruzi infection is a serious problem. 3.T. Cruzi-infected cells are more likely to undergo cytokinesis than multinucleated cells. In addition, the regulation of cytokinesis by Rhodamine Phalloidin and the detection of cytokinesis by light antibody are also discussed. Western blot, antibody search Anti-insect antibodies, host cells, T. cruzi no 4. The cell death process (loss) is the process of cell death.