トリパノソーマ感染宿主細胞のCa^<2+>動態と細胞内情報伝達系の解析

锥虫感染宿主细胞中Ca^2+动力学和细胞内信号转导系统分析

• 批准号: 06770192
• 负责人: 嶋田 淳子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770192/
• 关键词: トリパノソーマ; カルシウムイオン; fura-2; 宿主細胞

1.Trypanosoma cruziとHeLa細胞を宿主細胞としたin vitro感染モデル系を確立したので、このモデル系を、顕微分光システムで測定できるよう改変した。Poly-L-lysineであらかじめcoatingしたカバーグラスを60mmシャーレに入れ、対数増殖期のHeLa細胞(5 x 10^3 cells/ml)を5ml分注し、2日後に、感染培養細胞上清から得たトリポマスティゴ-ト(5 x 10^4 cells)を感染させた。2.カルシウム濃度測定用ケイ光指示薬であるfura-2をHeLa細胞に導入する方法を検討した。Fura-2のアセトキシメチル体であるfrua-2AMは哺乳類細胞に取り込まれやすく、細胞内のエステラーゼによりfura-2に変換されることが知られている。そこで、fura-2 AM (1μM)をT.cruzi感染HeLa細胞または非感染細胞に導入し、37℃で45分間インキュベートした。HeLa細胞に取り込ませたfura-2-AMは、この条件でfura-2への変換が起こっていることを確認した。3.高感度ケイ光顕微分光システムに画像解析システムを連結した装置を用い、T.cruzi感染HeLa細胞または非感染細胞内の遊離カルシウムイオン濃度([Ca^<2+>]_i)を定量した。各々50個の細胞について[Ca^<2+>]_iを測定したところ、非感染細胞は通常の哺乳類[Ca^<2+>]_iと同レベルの115±8nM、感染細胞では304±28nMであり、約2.6倍感染細胞の方が高い値を示した。以上より、T.cruziの感染により宿主細胞のCa^<2+>動態が変化していることが明らかとなり、感染宿主細胞および宿主内原虫の情報伝達系への影響に興味がもたれる。今年度は当初の研究実施計画の95%が達成された。

1. Trypanosoma cruzi and HeLa cells are host cells and in vitro infected cells. Poly-L-lysine was injected into HeLa cells (5 x 10^3 cells/ml) at the stage of proliferation by 5ml aliquot. After 2 days, the supernatant of infected cultured cells was infected by poly-L-lysine (5 x 10^4 cells). 2. The method of introducing fura-2 into HeLa cells for measuring the concentration of fura Fura-2 is a mammalian cell. HeLa cells infected with fura-2 AM (1μM) were introduced at 37℃ for 45 minutes. HeLa cells were selected from fura-2-AM, fura-2-AM, fura-2-AM 3. High sensitivity light differential light system analysis system link device, T. cruzi-infected HeLa cells and non-infected cells free system concentration ([Ca^<2+>]_i) was quantified. [Ca ^<2 +>]_i was measured in 50 cells, 115±8nM in non-infected cells and 304±28nM in infected cells, approximately 2.6 times higher than in normal mammalian cells. The infection of T.cruzi affects the Ca^<2+> dynamics of host cells and the information transmission system of protozoa in host cells. This year, 95% of the original research implementation plan was achieved.