補体の脂質膜破壊機能を利用した新規分析法の開発―血中の抗体濃度の定量―

利用补体的脂膜破坏功能开发新的分析方法 - 血液中抗体浓度的定量 -

• 批准号: 14655295
• 负责人: 加藤 敬一
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14655295/
• 关键词: 補体; 抗体分析; 脂質膜; リポソーム; 脂質ベシクル; 抗体; IgG; W; O; Wエマルション

[目的]本研究では、生体内投与可能なエマルションなどの担体を用いて、以下の原理に基づく、新規な抗体分析法を確立することを目的とした。その分析原理は、(1)上記の担体に抗原を固定して、その担体を抗体の溶存液中に投入する。(2)さらにその溶液中に投入した補体が、担体上の抗原-抗体結合部位を攻撃し、担体の脂質膜を破壊して担体内から漏出してくるトレーサーの濃度を測定することにより、間接的に溶存抗体濃度を同定しようとするものである。今年度はヒト血液中の抗体濃度測定を目標とした。[結果]抗原-抗体のモデル反応系として、第一はCRP (C-Reactive Protein)抗原に対する抗CRP抗体を、第二は、リゾチーム抗原に対する抗リゾチーム抗体の二つの系を選択した。用いた担体は、主として、Span80、大豆油などからなるW/O/Wエマルション(単一の液膜ベシクル型)である。その結果、(1)二種の抗原-抗体反応系ともに、前述の原理に基づく抗体の定量が可能であり、本法による抗体の定量法の確立に成功した(2)W/O/Wエマルションはベシクルに比べ、安定性に欠けるものの分析感度は高いので、エマルションを優先して使用することにした。(3)担体の粒子径のばらつきが抗体濃度測定の誤差の原因となり、出来る限り均一な粒子の調製の必要性を指摘した(4)カチオン界面活性剤を使用して、抗原の固定化量を増すことに成功した(5)血清成分が抗体溶存液中に含有すると、エマルションはほぼ100%破壊される(6)補体に含まれる血清成分がエマルションの脂質膜を直接破壊し、誤差の原因になることを明らかにした。(7)ヒト血液を約50倍希釈することにより、ヒト血液中に溶解させた抗CRP抗体(最少濃度で約2μg/ml)の濃度を、本法により同定する事に成功した。なお、本研究の成果は、現在Biochimica et Biophisica Actaに投稿予定である。

[Objective] This study aimed to establish a new antibody assay based on the following principles: The analytical principle is as follows: (1) Immobilization of antigen on the carrier and injection of antibody on the carrier. (2)The complement is added to the solution, the antigen-antibody binding site on the carrier is attacked, the lipid membrane of the carrier is broken, the concentration of the antibody in the carrier is measured, and the concentration of the antibody dissolved indirectly is determined. This year, the antibody concentration in the blood was determined. [Results] Antigen-antibody anti-CRP antibody system was selected as the first anti-CRP (C-Reactive Protein) anti-CRP antibody system and the second anti-CRP antibody system as the second anti-CRP antigen system. Use medium carrier, main carrier, Span80, soybean oil, W/O/W, etc. The results are as follows: (1) Two kinds of antigen-antibody reaction systems are suitable for the determination of antibodies based on the principles mentioned above;(2)W/O/W ratio is higher than that of stability; and (3) the analytical sensitivity is higher than that of stability. (3)Reasons for errors in antibody concentration measurement due to particle diameter of the carrier: (4) Reasons for errors in particle preparation due to uniformity of particle diameter: (5) Reasons for errors in antibody concentration measurement due to uniformity of particle diameter: (6) Reasons for errors in antibody concentration measurement due to uniformity of particle diameter: (7) Reasons for errors in antibody concentration measurement due to uniformity of particle diameter: (8) Reasons for errors in antibody concentration measurement due to uniformity of particle diameter: (9) Reasons for errors in antibody concentration measurement due to uniformity of particle diameter: (10) Reasons for errors in antibody concentration measurement 100% of the total complement is contained in the serum, and the lipid membrane is directly broken. (7)The concentration of anti-CRP antibody dissolved in the blood (minimum concentration of about 2μg/ml) was successfully determined by this method. The results of this study are now available for submission to Biochimica et Biophisica Acta.