記億喪失性貝毒原因藻の培養液中の細菌における抗ドウモイ酸抗体と反応するペプチド

与遗忘性贝类毒藻培养物中细菌中的抗软骨藻酸抗体发生反应的肽

• 批准号: 14656083
• 负责人: 児玉 正昭
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656083/
• 关键词: ドウモイ酸; 記憶喪失性貝毒; 抗体; western blotting; ELISA; protease; タンパク; 抗ドウモイ酸抗体; 細菌; ドウモイ酸結合タンパク; thorny oyster; Pseudo-nitzschia

ドウモイ酸のカルボキシル基にBranaらの方法に従いウシ血清アルブミン(BSA)を結合したものを抗原として抗体を作成した。本抗体を用いるwestern blottingで細菌タンパク中に抗体で染色される1本のバンドを観察した。前年度は抗体との反応を指標に本タンパクの精製を試みたが、含量が少なく精製に至らなかった。一方、western biottingで種々の貝類のタンパク画分をスクリーニングしたところ、ホタテガイおよびイワガキに強い反応が認められた。これらタンパク中の抗体と反応している成分がドウモイ酸であるか否かをまず明らかにするために、同成分を含む画分を非特異的proteaseで消化して消化物中の抗体と反応する成分を上記抗体を用いるELISAで検討した。消化物を分子量5000の膜でろ過し、ろ液をELISAで分析したところ強い反応が認められた。しかし、これをドウモイ酸分析用HPLCで分析したところドウモイ酸に相当するピークは認められなかった。このことは試料中の抗ドウモイ酸抗体に反応する物質はドウモイ酸そのものではないことを示すものである。消化に用いたproteaseはペプチド結合を加水分解し、タンパクとドウモイ酸が他の結合様式で結合している場合は本酵素による消化ではドウモイ酸は遊離しない。これを明らかにするには本物質の構造を解析する必要がある。そこでELISAに対する反応を指標に逆相ODSカラムを用いるHPLCにより本物質の精製を試み、ELISAと反応する物質が1成分であり、HPLCを繰り返すことによりこれを高度に精製できることが明らかになった。現在構造解析に必要な量の物質の精製を進めている。

The method for preparing the antibody is to bind the antibody to the antibody. This antibody is used for Western blotting of bacteria. This antibody is used for Western blotting. In the past, the antibody content was refined. A side, western biotting, species of shellfish, species of shellfish The antibody in the digest is detected by ELISA. The antibody in the digest is detected by ELISA. Digest molecular weight of 5000 membrane, liquid ELISA analysis, strong reaction, recognition HPLC analysis for acid analysis The substance in the sample that reacts with the antibody to the acid is called the "anti-acid." Digestion uses a protease that binds to water and acid and binds to other enzymes. The structure analysis of this material For ELISA, reverse phase ODS, HPLC, purification of the substance, ELISA, reverse phase ODS, HPLC, purification of the substance. Now the refinement of the amount of matter necessary for structural analysis is advancing.