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内耳原基の器官培養系を用いた内耳の形態形成機構と内耳奇形発生のメカニズムの解明

利用内耳原基器官培养系统阐明内耳形态发生机制和内耳畸形机制

基本信息

批准号：
14657005
负责人：
塩田浩平
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657005/
关键词：
耳胞内耳神経堤細胞マウス胎児器官培養 TGFβ2 Snail Slug TGFβ slug 内耳原基半規管蝸牛 snail

项目摘要

1.内耳の原基である耳胞から蝸牛および三半規管が発生する。ICRマウス胎児の耳胞を経時的にとり出し、免疫組織化学的染色を施して、内耳神経節(cochleovestibular ganglion, CVG)の発生を調べた。その結果、胎齢9.5〜11.5日胎児の耳胞で、前腹側の上皮細胞にTGFβ2が発現しており、その分布はニューロン前駆組織のマーカーであるNeuroDの発現部位と一致していた。また、その部位にSmad2も共発現していることが確認された。このことから、内耳神経節の形成にTGFβ2が関与している可能性が示唆された。2.内耳神経節(CVG)の形成におけるTGFβ2の役割を調べるため、昨年度までに我々が開発した耳胞の器官培養法を用い、耳胞上皮からCVGニューロンの前駆細胞がどのように発生し分化するかを観察した。10.5日マウス胎児の耳胞を切り出しコラーゲンコートディッシュで培養したところ、4時間後から細胞が耳胞の外へ遊走し、10時間後までに明瞭な細胞塊を形成した。これらの細胞はTuj1陽性であり、CVGを形成するニューロン前駆細胞と考えられた。次に、培地にTGFβ2(10ng/ml)を添加したところ、耳胞から遊出するTuj1陽性細胞が有意に増加した。この結果から、CVGの形成にTGFβ2が促進的な役割を果たすことが確認された。なお、上皮・間葉転換に関与するSlugの発現をRT-PCRで調べたところ、TGFβ2処理群でその量が低下していた。このことから、耳胞からニューロンが遊出してCVGを形成する現象は、上皮・間葉転換とは異なる機構であると考えられた。

1. The primordia of the inner ear are developed from the ear cells and the semicircular canals. ICR staining was used to detect the development of cochlear ganglion (CVG). As a result, TGFβ2 was detected in the ear cells of the fetus from 9.5 to 11.5 days old and in the epithelial cells of the anterior ventral side, and its distribution was consistent with the location of NeuroD's occurrence in the anterior cervical tissue. Smad2 was found in the middle of the room and confirmed. The relationship between TGFβ2 and the formation of neurokinesis in the inner ear is suggested. 2. The regulation of TGFβ2 activity in the formation of CVG was observed in the development and differentiation of ear cells in organ culture in the past year. 10.5 After 4 hours of culture, the cells migrated outside the ear, and after 10 hours, the cell mass was formed. The cells were positive for Tuj1 and CVG. TGFβ2(10ng/ml) was added to the culture medium, and Tuj1 positive cells were increased intentionally. The results showed that CVG formation was promoted by TGFβ2. The expression of TGFβ2 was significantly lower in the control group than in the control group. The phenomenon of cell migration and CVG formation was studied.

项目成果

期刊论文数量（16）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Transforming growth factor β-2 promotes the formation of the mouse cochleovestibular ganglion in organ culture.

转化生长因子β-2促进器官培养中小鼠耳蜗前庭神经节的形成。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Int.J.Dev.Biol. 49・1
影响因子：
0
作者：
Okano;J.;et al.
通讯作者：
et al.

Komatsu, S., et al.: "A quantitative study of the facial nerve in mice prenatally exposed to ethanol"Congenital Anomalies. 43・1. 41-45 (2003)

Komatsu, S., et al.：“产前暴露于乙醇的小鼠面神经的定量研究”先天性异常 43・1 (2003)。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Cohen MM Jr., Shiota K.: "Teratogenesis of holoprosencephaly."American Journal of Medical Genetics. 109. 1-15 (2002)

Cohen MM Jr.、Shiota K.：“前脑无裂畸形的畸形发生”。美国医学遗传学杂志。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Saitsu, H., et al.: "Spatial and temporal expression of folate-binding protein 1 (Fbp1) is closely associated with anterior neural tube closure in mice"Developmental Dynamics. 226・1. 112-117 (2003)

Saitsu, H., et al.：“叶酸结合蛋白 1 (Fbp1) 的空间和时间表达与小鼠前神经管闭合密切相关”Developmental Dynamics 226·1 (2003)。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Disruption of actin cytoskeleton and anchorage-dependent cell spreading induces apoptotic death of mouse neural crest cells cultured in vitro

DOI：
10.1002/ar.a.20150
发表时间：
2005-02-01
期刊：
ANATOMICAL RECORD PART A-DISCOVERIES IN MOLECULAR CELLULAR AND EVOLUTIONARY BIOLOGY
影响因子：
0
作者：
Hinoue, A;Takigawa, T;Shiota, K
通讯作者：
Shiota, K