インフルエンザ脳症における血管内皮細胞機能障害のメカニズムについての解析

流感脑病血管内皮细胞功能障碍的机制分析

• 批准号: 14657180
• 负责人: 若宮 伸隆
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657180/
• 关键词: コレクチン; レクチン; 動脈硬化; スカベンジャー受容体; 補体; 微生物; スカンベンジャー受容体

平成14〜15年度の研究成果としては以下の如く、以下のプロジェクトが進展した。インフルエンザ脳症を、血管内皮細胞の機能障害ととらえ、血管内皮特異的スカベンジャー受容遺体であるCL-P1に焦点をあてて、そのウイルスとの結合とエンドサイトーシスが本受容体でされるのか?また、血管に何らかのストレス負荷がかかったときのCL-P1の役割を、明らかにするのが本研究の目的である。(1)血管内皮細胞存在型コレクチン遺伝子CL-P1の遺伝子クローニングが一段落終了した。1.ヒトCL-P1cDNAのクローニング2.マウスCL-P1cDNAのクローニング3.ラットCL-P1cDNAのクローニング4.アフリカツメガエルCL-P1cDNAのクローニング5.ゼブラフィッシュCL-P1cDNAのクローニング(2)ヒト、ゼブラフィッシュCL-P1遺伝子発現細胞株の樹立1.永久発現株細胞の樹立・発現レベルの異なる株を10数種得た。2.部分遺伝子発現細胞株の樹立は数株得た。(3)ヒトCL-P1遺伝子永久発現細胞株におけるウイルス粒子結合、エンドサイトーシス解析を行った。1.CHO細胞はHSVに対する受容体は存在せず、ウイルスは感染しない。本細胞にCL-P1遺伝子永久発現させHSVのエンドサイトーシスがおこることを確認した。しかし全細胞にはエンドサイトーシスはおこらず、何らかの細胞状態がエンドサイトーシスに関与することがわかった。2.数種のウイルスをGFPラベルして、発現細胞への結合をみたが、特異的な結合はみられなかった。(4)ヒト血管内皮細胞株HUVECにおいての発現調節1.各種カイトカイン刺激による発現増強を確認、mRNAの増加からの蛋白発現増加がみられた。2年間の研究ではウイルスレセプターとしての可能性をいくつかのウイルスで検討したが、発現細胞株への特異的な結合はみられなかった。つぎにウイルス感染による2次的刺激でのCL-P1の増強を想定し、各種サイトカインでの影響を検討したところ、mRNAレベルからのCL-P1の発現誘導がみられた。常在型のコレクチンであるが、血管内皮細胞に何らかの刺激が与えられると、CL-P1のより一層の発現誘導がみられことが明らかになった。また時相としては、24時間経ってから、発現上昇がみられ、通常の一次反応でおこる発現誘導とは時相が異なることが認められた。インフルエンザ脳症での急性期での発現増強の確認が必要であると感じた、単クローン抗体での免疫染色を予定している。

Research achievements in Heisei 14 - 15 are as follows: The disease, vascular endothelial cell dysfunction, vascular endothelium-specific dysfunction, vascular endothelium-specific dysfunction, vascular endoth Moreover, the increased stress on blood vessels and the increased activity of CL-P1 are consistent with the purpose of this study. (1)Vascular endothelial cells exist in the gene CL-P1, and the gene CL-P1 is the end of a paragraph. 1. CL-P1cDNA development 2. CL-P1 cDNA development 3. CL-P1cDNA development 4. CL-P1cDNA development 5. CL-P1 cDNA development 2. CL-P1cDNA development 3. CL-P1 cDNA development 4. CL-P1cDNA development 5. CL-P1cDNA development 6. CL-P1cDNA development 7. CL-P1cDNA development 8. CL-P1 cDNA development 7. CL-P1 cDNA development 8. CL-P1 cDNA development 7. CL-P1 cDNA development 7. 2. Some of them were found in the cell lines and several were obtained. (3)CL-P1 gene is a cell line that permanently develops cell particles and analyzes them. 1. CHO cells are infected with HSV. The CL-P1 gene was found permanently in this cell. All cell types are related to cell types. 2. Several kinds of GFP binding proteins are found in cells, and specific binding proteins are found in cells. (4)1. Identification of mRNA and protein expression in HUVEC cells stimulated by various factors 2 years of research on the possibility of cell culture and the development of cell line-specific binding The expression of CL-P1 was induced by two stimuli, and the effects of various stimuli were investigated. The expression of CL-P1 is induced by the stimulation of vascular endothelial cells. The time is different, the time is different. It is necessary to confirm the increase in the development of acute phase of the disease by immunostaining for antibodies.

项目成果

若宮伸隆, 吉田逸朗, 小笠原正洋, 福澤純, 大谷克城, 小山聡: "生体防御レクチンとしてのコレクチンファミリー"北海道医学雑誌. 79(1). 3-7 (2004)

Nobutaka Wakamiya、Itsuro Yoshida、Masahiro Ogasawara、Jun Fukuzawa、Katsushiro Otani、Satoshi Koyama：“作为生物防御凝集素的集合素家族”北海道医学杂志 79（1）（2004）。

Zhao H., Wakamiya, N., Suzuki, Y., Hamonko, M.T., Stahl, G.L: "Identification of human mannose binding lectin (MBL) recognition sites for novel inhibitory antibodies"Hybridoma and Hybridomics. 21(1). 25-36 (2002)

Chao H.、Wakamiya, N.、Suzuki, Y.、Hamonko, M.T.、Stahl, G.L：“新型抑制性抗体的人甘露糖结合凝集素 (MBL) 识别位点的鉴定”杂交瘤和杂交组学。

若宮伸隆, 鈴木定彦: "MBL(mannan-binding lectin)その機能と生理学的意義"中国四国支部会誌. 17. 2-12 (2002)

若宫信孝、铃木贞彦：“MBL（甘露聚糖结合凝集素）的功能和生理意义”中国四国分部杂志 17. 2-12（2002）。

大谷克城, 若宮伸隆: "Annual Review免疫2002"感染防御とコレクチンファミリー. 217-225 (2002)

Katsushiro Otani、Nobutaka Wakamiya：“免疫学年度评论 2002”感染防御和凝集素家族 217-225 (2002)。

Ishibashi K, Kaneko H, Kira T, Hashimoto KI, Ogasawara M, Ohtani K, Suzutani T, Ishioka K, DeClercqE, Wakamiya N, Saijo M: "Differential Mutation Patterns in Thymidine Kinase and DNA Polymerase Genesof Herpes Simplex Virus Type 1 Clones Passaged in the Pr

Ishibashi K、Kaneko H、Kira T、Hashimoto KI、Ogasawara M、Ohtani K、Suzutani T、Ishioka K、DeClercqE、Wakamiya N、Saijo M：“传代的单纯疱疹病毒 1 型克隆的胸苷激酶和 DNA 聚合酶基因的差异突变模式