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新規コレクチンを用いた、細胞内O-GlcNAc糖鎖の生理的役割の解明

使用新型集合素阐明细胞内 O-GlcNAc 糖链的生理作用

基本信息

批准号：
11159207
负责人：
若宮伸隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159207/
关键词：
コレクチンレクチンウイルス補体

项目摘要

O-GlcNAc糖鎖は、蛋白のセリンやスレオニンのアミノ酸残基(Ser/Thr)に結合する糖鎖であり、UDP-GlcNAc-β-N-acetylglucosaminyltransferase(O-GlcNAc transferase)によって糖付加が行われると考えられている。この糖鎖の付加は細胞内蛋白(核蛋白、細胞質存在蛋白)のみに認められ、生命現象に重要な役目を担っていることが推測される。我々は、コレクチンの糖結合活性が上記の糖鎖とオーバーラップすることから、コレクチンのモチーフを利用して新規コレクチンのクローニングを企画し、細胞内糖鎖の機能を探ろうと考えた。1)我々は、細胞質存在タイプの新規コレクチンを想定し、その遺伝子クローニングを試み、本年度候補遺伝子の一つCL-L1遺伝子のクローニングに成功した。さらにCL-L1遺伝子を大腸菌で発現させ、抗体作成を行い、本レクチンが細胞質存在型のレクチンであることを証明した(J.Biol.Chem.1999)。その後本レクチンのマウスホモローグをクローニングした。本レクチン遺伝子は非常に遺伝子保存率が高く、生体にとって重要な働きをしていることが示唆された。2)レクチン遺伝子の機能を探るには、真核細胞での発現系が必須であり、新しいベクターを作成して、その発現系を確立し、その生物学的活性を比較検討した(J.lmmunol.Methods,1999)。またin vitro transcription & translationの系で本レクチン蛋白の作成を行い、レクチン活性を比較検討した。また、本蛋白は大腸菌を免疫して得られた抗体とも反応し、リガンドブロットや種々の実験を通して細胞内や組織におけるコレクチンの役割を検討している。

O-GlcNAc glycan chain, protein chain and amino acid residue (Ser/Thr) binding to glycan chain, UDP-GlcNAc-β-N-acetylglucosaminyl transferase (O-GlcNAc transferase) binding to glycan chain, UDP-GlcNAc-β-N-acetylglucosaminyl transferase (O-GlcNAc transferase) binding to glycan chain. These glycoproteins are associated with intracellular proteins (nuclear proteins, cytoplasmic proteins), and are important for life phenomena. The sugar binding activity of the protein was investigated by using the new regulation of the protein binding activity and the function of the intracellular sugar binding activity. 1)We have successfully established a new protocol for the existence of cytosol, a new protocol for the identification of cytosol, and a new protocol for the identification of cytosol candidates for this year. The CL-L1 gene was detected in Escherichia coli, antibody production was carried out, and the cytoplasmic presence of CL-L1 was demonstrated (J.Biol.Chem.1999). This is the first time that I've seen you. The survival rate of this gene is very high, and the organism is very important. 2) To explore the function of the gene, the development system of eukaryotes must be constructed, the development system of eukaryotes established, and the biological activity of eukaryotes compared (J. lmmunol. Methods, 1999). In vitro transcription & translation system, the production of protein and its activity were compared. This protein is immune to E. coli, and it can be used to detect the presence of antibodies and enzymes in the intracellular tissue.