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歯周病原性細菌における新規の膜結合型タンパク質の遺伝学的探求とその精製の試み

牙周病原菌中新型膜结合蛋白的遗传探索并尝试纯化它们

基本信息

批准号：
14657479
负责人：
加藤有三
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

歯周病原性細菌Porphyromonas gingivalis(P.g.)の産生する2つのシステインプロテアーゼRgpとKgpはプロテアーゼドメインと血球凝集素ドメインの2つの機能ドメインを持つ構造上類似した酵素である。プロテアーゼドメインの内膜から外膜への膜輸送機構にC末端側の血球凝集素ドメインが関与しているかどうかを調べるため、2つの酵素の内の一つKgpをKgp欠損変異体で発現させた。まず、Pg内で安定に存在するプラスミドpYKP028にKgp遺伝子を挿入し、Kgp欠損変異体KDP129へ導入した。このプラスミドにはテトラサイクリンの薬剤耐性遺伝子が含まれており、これにより変異体の選別を行った。発現の確認は合成基質を用いたKgp活性測定と抗体を用いたウエスタンブロット解析で行った。プロテアーゼの正確なC末端側が決定されていないため、分子量から換算したプロテアーゼドメインを導入した結果、その活性および発現は認められなかった。これが正確なC末端側ではなかったためかどうかは現在のところ不明であるが、血球凝集素ドメインの一部を含むコンストラクトではKgp活性および発現が認められたことから、プロテアーゼの発現に血球凝集素ドメインが必要である可能性が示唆された。この変異体はKgp欠損変異体が失った性質、すなわち黒色色素産生能などの回復も認められ、野生型とほぽ同等の性質を持つものと思われる。さらに、血球凝集素ドメインのどの部位が必須か等の解析を行う予定である。

Porphyromonas gingivalis(P.g.) The production of hemagglutinin is structurally similar to that of enzymes. The hemagglutinin in the C-terminal side of the membrane transport mechanism in the inner membrane and outer membrane of the membrane transport mechanism in the membrane transport mechanism. Kgp gene is introduced into the system, Kgp gene is introduced into the system, and Kdp gene is introduced into the system. This is the first time that a patient has been diagnosed with a disease, and the second time that a patient has been diagnosed with a disease. To confirm the synthesis of matrix, Kgp activity assay and antibody analysis. The correct C-terminal side is determined by molecular weight conversion, and the activity is determined by molecular weight conversion. A part of hemagglutinin is contained in the terminal side of hemagglutinin. The activity of Kgp is detected and the possibility of hemagglutinin being detected is indicated. The mutant Kgp is deficient, the mutant Kgp, the mutant Kgp is deficient, the mutant Kgp, the mutant Kgp is deficient, the mutant Kgp, the mutant Kgp is deficient, the mutant Kgp In addition, hemagglutinin must be analyzed according to the position of hemagglutinin.