エナメル芽細胞におけるRNAフィンガーブリンティング

成釉细胞中的RNA指状闪光

• 批准号: 08877276
• 负责人: 加藤 有三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877276/
• 关键词: エナメル芽細胞; ディフィレッシャル ディスプレー; PCR; mRNA; ディフィレンシャル ディスプレー

15-25週齢Wistar系ラット上顎切歯のエナメル芽細胞層を3分割に剥離し、歯胚側からそれぞれ基質形成期、成熟期前期、および成熟期後期とし、それぞれの細胞層からtotal RNAを回収した。下流アンカープライマーT15V(5´CCCT15V3´ VはA,G,Cのいずれか)を用いて逆転写反応を行いfirst strand cDNAを合成した。次いで、上流プライマー(20mer)を添加し、PCRを行った。PCR産物をポリアクリルアミドゲルで展開し、3つの細胞分化段階で産生量の違いが見られるバンドを切り出し、DNAの配列を決定した。現在までに、基質形成期:25クローン、成熟期前期:3クローン、および成熟期後期:9クローンの配列を決定した。基質形成期にアメロゲニンの遺伝子発現が認められたことは、この方法の信頼性を反映していると考えられた。配列を決定した遺伝子の中で興味深いものとして、次のような遺伝子とホモロジー(%)の高いクローンが挙げられる(昨年報告したもを除く)。基質形成期:カドヘリン関連腫瘍抑制遺伝子(69%)、タイプVIコラーゲン(82%)、ファーチリンα(72%)、グランザイムF(64%)、ゴリアスタンパク質(90%)、成熟期前期:プロテイン4.1(83%)、膜コート因子(66%)、成熟期後期:染色体分離タンパク質(91%)、M6P受容体(64%)、ERCC2(68%)。このうちゴリアスタンパク質のmRNAの発現をin situハイブリダイゼーションで確認し、成熟期エナメル芽細胞に豊富に存在していることを明らかにした。また、in situハイブリダイゼーション法を用い、フェリチンH,L鎖mRNAも基質形成期のエナメル芽細胞層に発現していることを明らかにした(Miyazaki et al.1998in press)。

15-25 The total RNA in the cell layer of the upper mandibular incisor was separated into three parts, and the total RNA in the cell layer of the upper mandibular incisor was separated from the embryonic side of the tooth. The total RNA in the cell layer of the upper mandibular incisor was separated into three parts. Downstream T15V(5 ′ CCCT15V3 ′ V) was synthesized by reverse transcription of the first strand cDNA Add to cart, add to cart, add to cart PCR products are divided into three categories: development, production, detection, and DNA alignment. The matrix formation stage:25 ° C, the early maturity stage:3 ° C, and the late maturity stage:9 ° C. The development of matrix formation and the reliability of matrix formation are discussed. The allocation is determined by the number of participants in the middle and the number of participants in the middle and the number of participants in the middle. Matrix formation stage: CRIT inhibitor (69%), CRIT receptor (82%), CRIT α(72%), CRIT F(64%), CRIT protein (90%), early maturity stage: CRIT 4.1(83%), membrane CRIT factor (66%), late maturity stage: chromosome segregation protein (91%), M6P receptor (64%), ERCC2 (68%). The expression of mRNA in mature cells was confirmed. The expression of mRNA in mature cells was confirmed. The method of "in situ" was used to detect mRNA expression during matrix formation and in bud cell layers (Miyazaki et al.1998in press).

项目成果

F.Hashimoto et al.: "Antigenicity of pro-Osteocalcin in hard tissue : the authencixity to visualise osteocalcin-producing cells" Journal of Bone and Mineral Metabolism. 15. 122-131 (1997)

F.Hashimoto 等人：“硬组织中骨钙素原的抗原性：可视化骨钙素产生细胞的真实性”《骨与矿物质代谢杂志》。

Y.Miyazaki et al.: "Expression and localization of ferritin mRNA in ameloblasis of rat incisor" Archives of Oral Biology. (in press). (1998)

Y.Miyazaki 等人：“大鼠门牙成釉细胞中铁蛋白 mRNA 的表达和定位”口腔生物学档案。

F.Hashimoto et al.: "Changes in expression of osteocalcin, Matrix Gla Protein and osteopontin mRNAs during experimental tooth movement in rats" Dentistry in Japan. 34(in press). (1998)

F.Hashimoto 等人：“大鼠实验性牙齿移动过程中骨钙素、基质 Gla 蛋白和骨桥蛋白 mRNA 表达的变化”日本牙科。