腫瘍における新規血管新生抑制物質PEDFの分解調節とその役割

新型血管生成抑制剂PEDF在肿瘤中降解的调控及其作用

• 批准号: 14657483
• 负责人: 森田 育男
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657483/
• 关键词: 抗腫瘍; 血管新生; PEDF; タンパク分解; VEGF; Flt-1; 口腔平扁上皮ガン

昨年度までに、PEDFの作用調節機序には1)過酸化脂質によるPEDF遺伝子の転写抑制、2)VEGF受容体であるFlt-1を介したVEGFによるPEDF遺伝子の転写促進、など転写レベルでの調節を明らかにしたので、本年度はPEDFタンパクの分解による作用調節機序に関し検討を行った。PEDFにGFPを融合させたタンパク質を用いて、ガン細胞、血管内皮細胞およびPEDF産生細胞である網膜色素上皮細胞を用いて、その分解タンパクをWestern blot法で調べた。その結果、PEDFのN末認識抗体、C末認識抗体、GFP抗体を用いて検討しても、外因的に添加したPEDFはどの細胞においても全く分解されないこと、および虚血等の条件に細胞をさらしても、PEDF分解は全く亢進されないことが明らかとなった。一方、Western blot法により細胞内のPEDFタンパクの挙動を調べたところ、産生されたPEDFタンパクは細胞内で分解されること、及び虚血時にその分解の亢進が認められた。また、免疫染色法により、細胞内のPEDFはアクチンと同じ局在をしていた。そこで、PEDFのN末deletion変異体を用いて、PEDFの細胞外遊離に対する影響を調べた。その結果、PEDFタンパクとは異なり、変異タンパクは細胞外へ放出されなかった。このことは細胞内でのN末分解の結果、細胞外へのPEDFタンパクの放出が抑制された可能性を示唆している。以上の結果は従来報告されていたようなPEDFタンパクの細胞外での分解がPEDFの活性調節機序である可能性は少なく、むしろPEDFの産生過程におけるPEDFタンパクの部分的分解がPEDFの作用を調節している可能性が高いことを意味している。昨年度および本年度得られた結果を考えると、当初想定したPEDFタンパクの分解をターゲットにした抗腫瘍療法の限界性が示され、PEDFを用いた抗腫瘍療法にはPEDFの遺伝子治療が有効であることが示唆された。

Yesterday annual ま で に, PEDF の role adjusting machine sequence に は acidification passes 1) lipid に よ る traces of PEDF 伝 son の planning write inhibition, 2) VEGF let body で あ る Flt 1 を interface し た VEGF に よ る traces of PEDF 伝 son の planning to promote writing, な ど planning write レ ベ ル で の adjust を Ming ら か に し た の で, this year's は PEDF タ ン パ ク の decomposition The による function regulates the sequence of に related to 検 and を lines った. PEDF に GFP fusion を さ せ た タ ン パ ク qualitative を with い て, ガ ン cells, endothelial cells お よ び PEDF cells で あ る を retinal pigment epithelial cells with い て, そ の decomposition タ ン パ ク を Western blot method で adjustable べ た. そ の results, PEDF の N know at the end of the antibodies, at the end of the C, GFP antibody を い て beg し 検 て も, exogenous に add し た PEDF は ど の cells に お い て も full く decomposition さ れ な い こ と, お よ び virtual に の conditions, such as blood cells を さ ら し て も, decomposition of PEDF は く hyperthyroidism さ れ な い こ と が Ming ら か と な っ た. Party, Western blot method に よ り intracellular の PEDF タ ン パ ク の 挙 motion を べ た と こ ろ, produce さ れ た PEDF タ ン パ ク で は cell decomposition さ れ る こ と and び when virtual blood に そ の decomposition の hyperthyroidism が recognize め ら れ た. ま た, immune staining に よ り, intracellular の PEDF は ア ク チ ン と with じ bureau in を し て い た. Youdaoplaceholder0 で で, PEDF <s:1> n-terminal deletion variant を, する て and PEDF <s:1> extracellular free に were used to adjust する effects を べた. そ の results, PEDF タ ン パ ク と は different な り, - different タ ン パ ク は extracellular へ release さ れ な か っ た. こ の こ と は intracellular で の N decomposition の results, at the end of the extracellular へ の PEDF タ ン パ ク の released が control さ れ を た possibility in stopping し て い る. の above results は 従 to report さ れ て い た よ う な PEDF タ ン パ ク の extracellular で の decomposition が PEDF の sequence active conditioner で あ less likely は る な く, む し ろ PEDF の process に お け る PEDF タ ン パ ク の part decomposition が PEDF function を regulation の し て い likely が る い こ と を mean し て い る. Yesterday's annual お よ び this year have ら れ た results を exam え る と, wanted to settle し た PEDF タ ン パ ク の decomposition を タ ー ゲ ッ ト に し た swollen sores treatment resistant の limit sex が shown さ れ, PEDF を with い た swollen sores treatment resistant に は PEDF の heritage 伝 son treatment が unseen で あ る こ と が sucking in さ れ た.

项目成果

Tsuji M, Murota s, Morita I: "Docosapentaenoic acid(22:5,n-3)suppressed tube forming activity in endothelial cells induced, by vascular endothelial growth factor"Prost.Leuko, Essent Ffatty Acid. 68. 337-342 (2003)

Tsuji M、Murota s、Morita I：“二十二碳五烯酸 (22:5,n-3) 抑制血管内皮生长因子诱导的内皮细胞管形成活性”Prost.Leuko、Essent Ffatty Acid。

Yoshino H, Morita I, Murota S, Ishikawa I: "Mechanical stress regulates production of angiogenic regulators in cultured human gingival and periodontal ligament fibroblasts"J Periodontal Res. 38. 405-410 (2003)

Yoshino H、Morita I、Murota S、Ishikawa I：“机械应力调节培养的人牙龈和牙周膜成纤维细胞中血管生成调节剂的产生”J 牙周研究。

Miyagishi D, Amagasa T, Murota S, Morita I: "Regulation of the expression of pigment epithelium-derived factor, an anti-angiogenic factor in human oral squamous cell carcinoma cell lines"Cancer Letter. (in press).

Miyagishi D、Amagasa T、Murota S、Morita I：“色素上皮衍生因子（人口腔鳞状细胞癌细胞系中的抗血管生成因子）表达的调节”癌症信。

WANG J, MORITA I.ONODERA M, MUROTA S: "INDUCTION OF KDR EXPRESSION IN BOVINE ARTERIAL ENDOTHELIAL CELLS BY THROMBIN : INVOLVEMENT OF NITRIC OXIDE"J CELL PHYSIOL. 190. 238-250 (2002)

WANG J、MORITA I.ONODERA M、MUROTA S：“凝血酶在牛动脉内皮细胞中诱导 KDR 表达：一氧化氮的参与”J Cell Physiol。

Ohno-Matsui K, Yoshida T, Uetama T, Mochizuki M, Morita I.: "Vascular endothelial growth factor upregulates pigment epithelium-derived factor expression via VEGFR-1 in human retinal pigment epithelial cells"Biochem.Biopys.Res.Commun.. 1303. 962-697 (2003)

Ohno-Matsui K、Yoshida T、Uetama T、Mochizuki M、Morita I.：“血管内皮生长因子通过人视网膜色素上皮细胞中的 VEGFR-1 上调色素上皮衍生因子表达”Biochem.Biopys.Res.Commun..